Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка):
кДНК
Праймер Т2
ПЦР с праймером Т1 |
Oлигo(dA)
Один цикл ПЦР с праймерами L1 и L2
Праймер L1
Праймер L2
?
| ПЦР с праймером Т2
Биотинилирование
Вычитающая гибридизация, удаление биотинилированных молекул
Заполнение концов
Лигирование с вектором
Рис. 54. Схема метода вычитающей гибридизации, использованная для выявления лимс| специфических генов в HIV/SIV-ассоциированных лимфомах
К ст. Л.Е. Андреевой, В.З. Тарантула
Рис. 60. Микроскоп с оптикой интерференционного контраста и микроманипулятор, используемые для микроинъекций экзогенной ДНК в яйцеклетки млекопитающих: общий план (А), камера с яйцеклетками (Б)
Рис. 61. Микроинъекция экзогенной ДНК в зиготы мыши: зиготы мыши (А), зигота мыши перед микроинъекцией раствора с экзогенной ДНК (Б)
Рис. 63. Зиготы свиньи до центрифугирования (А), микроинъекция экзогенной ДНК в зиго ту свиньи после центрифугирования (Б)
Рис. 65. Экспрессия репортерного гена CMV-lacZ в 3-суточных предличинках вьюна после оплодотворения икринок сперматозоидами, которые предварительно инкубировались в растворе с плазмидой, содержащей этот геи
SD SA
Рис. 66. Общая схема строения ретровирусного вектора, используемого для трансгеноза
LTR - длинные концевые повторы ретровируса, SA - акцепторный сайт сплайсинга, SD - донорный сайт сплайсинга, Ч' - участок, отвечающий за упаковку вируса
мк/эк
лц
эк
мк
РЦ
НБ
пхэ
БЭ
ПЭ
О 50 100
Рис. 67. Гистологический анализ костного мозга контрольных и трансгенных мышеи Fj-no-коления с геном ЭПО (бордовые столбики - контрольные мыши, синие - трансгенные)
ПЭ - ПрООритрОиласты; БЭ — базофильные эритробласты; ПХЭ - полихроматофильпые эритробласты; НБ - пормобласты; РЦ - ретикулоциты; МК - мислоидные клетки; ЭК - эритроидпые клетки; ЛЦ - лимфоциты
Рис. 68. Трансгенные эмбрионы вьюна с геном CMV-lacZ через 19 ч после оплодотворения
Рис. 69. Клоны клеток, экспрессирующих ген CMV-lacZ в мышцах 4-суточной личинки выона
70. Локализация экспрессии гена CMV-lacZ в 14-суточном эмбрионе мыши
Рис. 71. Поздняя бластоциста козы на 4-е сутки культивирования в среде для ЭСК
Рис. 72. Окраска на щелочную фосфатазу островков клеток козы, подобных эмбриональным стволовым клеткам
ic. 73. Эмбриоидное тело, образованное клетками козы, подобными эмбриональным ство->вым клеткам
Рис. 74. Инъекция ЭСК в полость бластоцисты мыши: бластоциста перед инъекцией бластоциста с ЭСК внутри бластоцеля (Б)
А а зигота перед энуклеацией
Б а неоплодотворенная яйцеклетка
Рис. 77. Схема получения клонированных животных с помощью пересадки ядер
А - реципиент ядра - оплодотворенная яйцеклетка (зигота) на стадии пронуклеусов, а - микроиипетка для удаления ядра находится напротив одного in пронуклеусов; 6 - оба пронуклеуса, окруженные небольшим количеством цитоплазмы и плазматическом мембраной, втянуты в энукпеационную мнкропн-петку. в - карнопласт или целая клетка с донорским ядром помещается под блестящую оболочку и сливается с ццтопластом путем электрослияния или. например, с помощью инактивированного вируса Сендай Б - реципиент ядра - овулировавший неоплодотворснньш ооцит. а - ооцит на стадии метафазы второго мейотического деления с метафазной пластинкой и веретеном деления на анимальном полюсе; б -плазматическая мембрана и небольшое количество цитоплазмы, содержащие веретено деления и мега-фазные хромосомы втягиваются в эпуклсационную микропипетку; в - кариопласт или целая клетка с донорским ядром помещается под блестящую оболочку и сливается с цитопластом путем электрослияния или инактивированного вируса Сендай, либо “голое" донорское ядро инъецируется непосредственно в цитоплазму (Solter, 2000)
К ст. А.И. Николаева
А
Ядро клетки-мишени
Микропипетка с раствором ДНК
Рис. 78. Альтернативные судьбы молекул экзогенной ДНК после ее переноса в клетки-мишени
А - интеграция с хромосомой клетки-мишени; 13 - автономное существование в виде экстрахромосомной кольцевой ДНК
Е Промотор 0 Промотор 1 Промотор 2
Участки инициации епликации гена с-тус
Бактериальная
последовательность
MMTI
промотор
Neo1
селективный маркер
Сигнал
полиаденирования SV40
В
Копийность
100
50
2 4 6 8 10
Время после трансфекции, (дни)
Рис. 80. Локализация хромосомного ori в локусе гена с-тус и конструкция автономного вектора, содержащего ARS-фрагмент этого ori (McWhinney, Leffak, 1990)
А - экзонно-интронная схема гена с-тус с прилегающей 5-областью, содержащей ARS-элемент и промоторы этого гена. Е - EcoRI, Н - Hindlll. X - Xhol. Красным цветом выделен ARS-элемент размером 2,4 т. п.н. Б - структура рекомбинантной автономной плазмиды pNeo.Myc - 2.4, содержащей ARS-элемент, размером 2,4 т. п.н.. ген пео под контролем ММТ-промотора и сигнала полиаденилирования SV40. В - пролонгированное поддержание автономно-реплицирующейся конструкции рКео.Мус - 2.4 в культуре клеток человека HeLa по сравнению с простой плазмидной конструкцией
Ori P
Family of repeats
Dyad
Полилнкер
Белок
EBNA-1
Вектор на основе ori Р (до 20 т. п. н.)
Г етерологическая к ДНК
EBNA-1
Amp
