Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Свердлов Е.Д. -> "Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1" -> 149

Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.

Свердлов Е.Д. Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 — М.: Наука, 2003. — 372 c.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка): perspektivimoleculyargenetiki2003.djvu
Предыдущая << 1 .. 143 144 145 146 147 148 < 149 > 150 151 152 153 154 155 .. 199 >> Следующая

клеток, причем все оставшиеся клетки имели апоптотические ядра. Из представленных данных можно заключить, что культура C410Y-poly является наиболее чувствительной к апоптотическим стимулам. Предполагается, что указанная мутация hPSl, ассоциированная с ранней аутосомнодоминантной формой Б А, может вызывать сходные изменения в нейронах, увеличивая их чувствительность к апоптотическим стимулам (Чернявская и др., 1998).
279
120
110
100
90
80
70
60-
50-
40-
30-
20-
10-
0-
--апоптотические-
га нормальные
it III
ТВ
Из
? I 1 ? 1 1
+NGF -NGF -NGF +NGF-NGF -NGF +NGF -NGF -NGF +NGF -NGF -NGF
H202
PC12
K-poly
N-poly
M-poly
Puc. 100. Влияние депривации и окислительного стресса на количество нормальных и апоп-тотических клеток в стабильно трансфицированных и контрольных культурах
0 о.
1
с
о\
т
Ш
I
i
с
г-
2
I
Z
тэ
с
чО
-94
Рис, 101. Влияние экспрессии нормального и мутантного hPSl на скорость пролиферации клеток стабильно трансфицированных клонов
а — число клеток дифференцированных культур на 6-й день культивирования на среде с NGF С100 нг/мл) и пониженным содержанием сыворотки (1%); б - Western-анализ экспрессии hPSl в трансфицированных клеточных культурах с исполь^юванием антител к N-концсвому участку белка
В дальнейшем было проведено изучение экспрессии экзогенного hPSl в моноклональных культурах. Многие клоны сохраняют высокий уровень экспрессии hPSl-C410Y до 20-го пассажа. Изучая клоны со стабильной, но различной степенью экспрессии hPSl, была показана зависимость уровня пролиферации клеток на среде, содержащей NGF, от количества белкового пропукта hPSl. На гистограмме (рис. 101) показано, что гиперэкспрессия не-процессированной формы 43 kD hPSl дикого типа (клон dN-F4) угнетает рост клеток по сравнению с контрольной культурой (К-ро1у).
Мутантный hPSl-C410Y (клон M1-D5) даже с меньшей экспрессией, чем у дикого типа, оказывает еще более негативное воздействие на пролиферацию клеток. Возрастание уровня экспрессии мутантного hPSl (клон М1-Е5) приводит к дальнейшему уменьшению пролиферации.
Таким образом, продемонстрированная корреляция скорости роста клеток и уровня экспрессии экзогенного hPSl, позволяет нам говорить о том, что мы имеем клеточную систему с негативным воздействием мутантного hPSl-C410Y, которую можно использовать как модельную для поиска и тестирования лекарственных препаратов, способных увеличивать жизнеспособность клеток, экспрессирующих hPSl, т.е. потенциальных агентов для терапии Б А.
В настоящее время полученные клеточные линии используются для тестирования потенциального терапевтического действия ингибиторов антео-тензин-превращающего фермента (АПФ или АСЕ), а именно каптоприла и эналаприла. Выбор данных препаратов обусловлен существующей гипотезой о тесной связи между сосудистыми и нейродегенеративными заболеваниями. Так, показаны: связь атеросклероза и болезни Альцгеймера, повышенный риск Б А у пациентов с гипертонией, уменьшение риска деменции у пожилых людей, проходивших курс лечения гипотензивными препаратами (ACE-ингибиторами). На основании перечисленных данных делается предположение о том, что особенности сосудистой системы человека (как генетические, так и обусловленные влиянием окружающей среды) могут коррелировать с предрасположенностью к деменции альцгеймеровского типа (Amouyel et al., 2000). Генами-кандидатами такой связи являются гены, кодирующие белки ренин-ангиотензиновой системы, важнейшего компонента в регуляции сосудистого гомеостаза. В ряде работ показана ассоциация полиморфизма в гене ангеотензин-I превращающего фермента, центрального белка ренин-ангеотензиновой системы, с Б А (Щербатых и др., 1999; Farrer et al., 2000). Предполагается, что генотип, определяющий пониженную активность ангиотензин превращающего фермента, может являться фактором, протектирующим развитие некоторых форм сенильной деменции Альцгеймеровского типа. Поэтому ингибиторы данного фермента могут быть потенциальными терапевтическими препаратами при БА.
Мы изучали действие каптоприла и эналаприла на скорость пролиферации трансформированных hPSl клеток. Под действием ингибиторов во всех вариантах трансфицированных культур пролиферация падает, что хорошо коррелирует с данными литературы. Известно, что каптоприл является ингибитором пролиферации клеток в ряде культур эпителиального и мезодер-мального происхождения (фибробласты, карциномы молочной железы, мезенхимы) (Chisi et al., 2000; Nguyen et al., 1994; Small et al., 1999). Для каптоприла и эналаприла показано также их влияние на снижение скорости роста клеток нейробластомы человека SH-SY5Y (Chen et al., 1991).
281
С другой стороны, для некоторых клеточных линий (клеток гематопоэ-тического ряда, эпителиальных клеток легких и кардиомиоцитов) показано, что под действием ACE-ингибиторов снижалась апоптотическая гибель клеток (Wang et al., 2000; Uhal et al., 1998; Li et al., 1997). Поэтому в настоящее время нами изучается действие ACE-ингибиторов на апоптоз в трансфицированных культурах с экспрессией hPSl (как мутантных форм, так и формы дикого типа).
Предыдущая << 1 .. 143 144 145 146 147 148 < 149 > 150 151 152 153 154 155 .. 199 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed