Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Свердлов Е.Д. -> "Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1" -> 107

Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.

Свердлов Е.Д. Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 — М.: Наука, 2003. — 372 c.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка): perspektivimoleculyargenetiki2003.djvu
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 199 >> Следующая

Экспрессия гена RS\-lacZ обнаружена у 13-дневного плода мыши в тканях экто- и мезодермального происхождения, а экспрессия гена CMV-lacZ -у 14-дневного плода в тканях всех трех зародышевых листков (Андреева и др., 1996) (рис. 70).
С целью выявления трансгена на доимплантационных стадиях развития млекопитающих в качестве репортерного гена нами был предложен ген SEAP. Этот ген интересен тем, что продукт его экспрессии может быть обнаружен в окружающей среде. Вектор, включающий кодирующую область этого гена под контролем промотора актина крысы или промотора CMV и 3'-области ГГР быка, инъецировали в пронуклеусы зигот коров и мышей. После культивирования в течение трех суток среду исследовали на наличие SEAP. Положительные группы отбирали и продолжали культивировать. Уровень секреции трансгена в среде превышал контрольный фон в 12-55 раз (Городецкий, Андреева, 1995; Chan et al., 1995).
Однако используемые методы детектирования экспрессии имеют свои недостатки. Большинство проблем связано с невозможностью отличить истинно интегрированный трансген от неинтегрированной экзогенной ДНК, экспрессирующейся экстрахромосомно. Также критичными для репортерных генов являются продолжительность экспрессии и ее интенсивность. Не во всех случаях на ранних стадиях дробления зародыша возможно немедленное обнаружение экспрессии трансгена (исключением является работа, когда для селективного отбора трансгенных предимплантационных эмбрионов мыши использовали ген GFP под промотором а-1-фактора элонгации человека) (Takada et al., 1997).
В настоящее время с помощью трансгеноза изучено большое число регуляторных элементов, которые обеспечивают экспрессию генов в разных органах, в определенных типах клеток и/или на определенных стадиях развития. В частности, нами была показана стадио- и тканеспецифическая экспрессия эмбрионального е-глобинового гена цыпленка, который был инъецирован в зиготы мышей. Гибридизационный анализ тотальной РНК, изолированной из 12-дневного трансгенного плода мыши, показал присутствие молекул, комплементарных перенесенному е-глобиновому гену цыпленка, при этом количество молекул мРНК составило примерно половину от количества молекул р-глобиновой РНК мыши. В эмбрионе не было обнаружено транскрипционной активности р-глобиновой РНК взрослой мыши. Транскрипты е-глобинового гена цыпленка отсутствовали в РНК, выделенной из печени новорожденной мыши (Tarantul et al., 1987).
ИССЛЕДОВАНИЯ РЕГУЛЯЦИИ И ФУНКЦИИ ВИРУСНЫХ ГЕНОВ
На модели трансгенных животных были получены многочисленные данные, касающиеся регуляции экспрессии клеточных и вирусных генов in vivo и их функции в целых организмах. Для понимания сложных процессов взаимодействия вирусов и клеток принципиально важным является выяснение функций отдельных вирусных генов, т.е. создание функциональной анатомии геномов вирусов. Вирусные гены, в отличие от клеточных, часто не имеют сходных генов в геноме и их эффект проявляется в “чистом” виде.
199
Таблица 1. Вирусные гены, индуцирующие онкогенез у трансгенных мышей (см. Тарантул и др., 1999)
Т рансген/промотор Опухоли
SV40 T-ag/ингибин Опухоль гонад
SV40 T-ag/эластаза Опухоль панкреатической железы
SV40 T-ag/антитромбин Гепатоцеллюларная карцинома
FLV env Эритролейкемия
JVC T-ag Опухоль нейронального креста
EBV EBNA-1/иммуноглобулин Лимфома
HBV Hbx/MT Гепатоцеллюлярная карцинома
HCV corefHBV Гепатоцеллюлярная карцинома
HSV16 Е7/кератин 14 Эпителиальная карцинома
PyV T-ag/C3 Инвазивная карцинома
HTLV-I pX/H-2Kd Карцинома молочной железы
HTLV-I гшг/иммуноглобулин Лимфома
HIV-1 tat/LTR Саркома Капоши
v-Па-гал/эмбриоиальиий глобин Эпидермальная папиллома
v-На-гйи/кальцитонин Тироидная карцинома
Трансгенные животные ягляются более адекватной моделью по сравнению с культивируемыми клетками для изучения молекулярных основ различных патологий, вызываемых продуктами отдельных вирусных генов (Тарантул, Мудрик, 1991).
В первых экспериментах на трансгенных мышах наше внимание было обращено на исследование регуляторных элементов, содержащихся в LTR RSV и LTR MuLV . Анализ РНК показал, что в ряде органов трансгенных мышей ген /А-HSV активно транскрибировался под контролем обоих типов LTR. При этом было выявлено аномальное развитие мышей с геном /A-HSV, содержащим в качестве промотора LTR MuLV, что коррелировало с наличием транскрипционной активности этой плазмиды (Газарян и др., 1984). В последующем было показано, что LTR этих двух провирусов не имеет сильно выраженной видо- и тканеспецифичности, а их промоторные свойства примерно одинаковы (Косиков и др., 1986).
Для выяснения реальных функций вирусных генов в клетках в ряде лабораторий были сконструированы трансгенные мыши, содержавшие единичные структурные и регуляторные гены вируса иммунодефицита (HIV) под контролем различных промоторов. В табл. 1 приведены данные по изучению с помощью трансгеноза роли в онкогенезе разных вирусных генов. В результате этих исследований были выявлены различные гены ДНК- и РНК-содержащих вирусов, не все из которых являются типичными онкогенами, но все способствуют развитию у трансгенных животных большого спектра неоплазий. Принципиально важно, что часто тип злокачественного перерождения, индуцируемого введением единичного вирусного гена, часто коррелирует с тем типом рака, который вызывается инфицированием организма соответствующим вирусом. Такая корреляция позволяет понять механизм канцерогенного действия вирусов, указывая на природу продукта, обусловливающего процессы опухолеобразо-вания.
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 199 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed