Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Степанов В.М. -> "Молекулярная биология. Структура и функция белков" -> 20

Молекулярная биология. Структура и функция белков - Степанов В.М.

Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функция белков — М.: Высшая школа, 1996. — 335 c.
ISBN 5-06-002573-Х
Скачать (прямая ссылка): strukturifunkciibelkov1996.djvu
Предыдущая << 1 .. 14 15 16 17 18 19 < 20 > 21 22 23 24 25 26 .. 140 >> Следующая

, - ^
группами, вытесняя прилегающие к этим структурам молекулы воды. Число и прочность таких контактов весьма различны у разных белков. Повышению их прочности способствует сорбция белков из концентрированных растворов солей, например сульфата аммония. Плавное понижение концентрации соли в растворе, протекающем через колонку с фенилсефарозой, приводит jc поочерёдной десорбции белков (рис.
Сходным образом действуют сорбенты, полученные присоединением
3.5. ГИДРОФОБНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ
''сн—о—сн2—сн—сн2—о—сС ^сн
' | чсн-сн'
он
ЧСН-С1Г
Фенил сефароза
3.3).
к макропористому кремнезему гидрофобных алкильных радикалов
50
различной длины. Они, - будучи -жесткими, особенно подходят для | работы при повышенном давлении t,S в условиях высокоэффективной «с жидкостной хроматографии ||
(ВЭЖХ, англ. HPLC). Те из них, которые содержат длинные — Ci8- ^
углеводородные цепи, малопригод- И 40 М ю
ты для разделения белков из-за Объем з/ноата, ш
слишком сильного, нередко нёобра- ^ис- 3.3. Выделение интерферона
фибробластов человека гидрофобной тимого связывания, но могут при- „а фени^сефарозе
меняться для хроматографии пеп- CL-4B:
тидов. Лучшие результаты дает i ~ содержание белка в алюате, 2 - гра-
хроматография белков на. сорбен- ди*нт концентрации этиленгликоля, ис-
, пользованного для десорбции, 3 - актив-
та*, содержащих более короткие - ^Г»ид™ "прос-
G4 — Cg-углеводородные цепи. кок", содержащий белки, которые не свя-
. Нередко гидрофобная хромато- зываются с сорбентом, и пик очищенного
графия сочетается с другими эф- ““тарФч**»
фектами. Например, присоединение к активированной бромцианом сефарозе диаминов различной длины дает сорбенты, в. которых ''содержатся гидрофобные углеводородные цепочки наряду е двумя картонными .группами. Объединение черт гидрофобного сорбента и анионита В одном хроматографическом материале' обогащает .это возможности.
Описанный выше способ проведения хроматографии на гидрофобном сорбенте — далеко не единственно возможный. Для сорбции4 белков не обязательно введение в раствор повышенных -концентраций соли, а для элюции можно применять добавление органических растворителей, сдвиг pH. В некоторых случаях, когда связывание белка основано на сочетании гидрофобных и ионных взаимодействий, хорошие результаты дает элюция растворами солей. Отметим также, что признаки гидрофобной хроматографии встречаются и в других приемах, разделения белков, в особенности в аффинной хроматографии.
>: N • 3.6. АФФИННАЯ, ИЛИ БИОСПЕЦИФИЧЕСКАЯ,
: 1 ¦ ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ
<ь.
Как уже отмечалось, способы разделения белков, основанные на различиях в их физико-химических свойствах, не могут быть высокоспецифичными. С этой точки зрения гораздо перспективнее препаративные методы, которые базируются на функциональных различиях
51
белков. Для множества белков, включая ферменты, их ингибиторы, транспортные белки, иммуноглобулины, регуляторные белки, токсины, рецепторы, — главнейшая функциональная черта состоит в способно^ сти избирательно связывать те или иные лиганды — субстраты, кофер-менты, аллостерические эффекторы, антигены и т.п.
Такое , связывание по существу своему весьма специфично, и это свойство резко выделяет тот или иной белок из множества других. На использовании функционально обусловленной способности белков обратимо связываться с соответствующими лигандами и основан метод аффинной, или биоспецифической, хроматографии. v
Для синтеза аффинного сорбента отвечающий специфичности данного белка лиганд, (субстрат или его аналог при хроматографии фермента) присоединяют к инертной матрице так, чтобы возможно меньше затронуть те элементы его структуры, которые непосредственно участвуют во взаимодействии с белком. Иногда лиганд прямо вводят в реакцию с функциональными группами на поверхности матрицы, однако чаще их соединяют через промежуточное звено ("вставку", "ножку" и т.п.), чтобы отдалить лиганд от матрицы и .уменьшить пространственные препятствия для его сближения с белком.
К каждому из элементов структуры аффинного, сорбента предъявляются определенные требования. Матрица должна быть инертной и-не создавать стерических препятствий, для белка. Чаще всего в качестве матрицы используют макропористые гели, образованные поперечно-сшитыми гидрофильными полимерами, например производное агарозы
— сефарозу, синтетические полимеры или неорганические носители' макропористые производные кремнезема — силикагель или стекло. Присоединение лигандов к сефарозе (непосредственно или через вставку) обычно проводят; активируя ее бромцианом. Бромциан (сильный яд!) в щелочной среде реагирует с гидроксильными группами сефарфт зы, образуя весьма активный эфир изоциановой кислоты: ,
Предыдущая << 1 .. 14 15 16 17 18 19 < 20 > 21 22 23 24 25 26 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed