Методы очистки белков - Скоупс Р.
Скачать (прямая ссылка):
245
Рис. 6.1. Изменение рКа в зависимости от температуры для фосфата (нижняя линия) и триса (верхняя линия). Обратите внимание, что температура оказывает лишь незначительное влияние на фосфат, но сильно влияет на трис.
больше он гидратируется. По тем же причинам цвиттерионы, буферное действие которых проявляется при более высоких значениях pH (из-за диссоциации протонированной аминогруппы), несколько менее чувствительны к температуре, чем сильные амины; они имеют п = — 1, а не п= + 1, но их нейтральная форма, вероятно, хорошо гидратируется, так как она несет как отрицательные, так и положительные заряды, что приводит к промежуточной величине AS0. Например, в случае ТЭС
ТЭС± -—> ТЭС"4-Н+ AS° = —30 Дж-град'1-моль"1.
На рис. 6.1 и 6.2 показаны изменения значений рКа для фосфата (р/Сг) и триса в зависимости от температуры и ионной силы. Характерно, что р/Са триса изменяется на одну единицу pH при изменении температуры от 4 до 37 °С — традиционные для биохимиков температуры.
В табл. 6.3 перечислены используемые буферы и указаны их свойства. Более подробные таблицы можно найти в работах
*
а
7,0
10 20 30
Температура, "С
40
Рис. 6.2. Влияние ионной силы на рКа фосфата (нижняя кривая) и триса (верхняя кривая). Влияние на фосфат в три раза сильнее, чем на трис (в соответствии с отношением значений я), и имеет противоположную направленность (так как п для фосфата отрицательно, а для триса положительно) .
Ионная сила
246
Глава 6
Таблица 6.3. Набор необходимых буферов
Название п РК*а Примечание
(25 °С)
Молочная кислота ---1 3,86
Уксусная кислота ---1 4,76
Пивалиновая кислота (триметилук- ---1 5,03 Не очень раствори
сусная кислота) ма; неприятный
запах
Пиридин +1 5,23 Летуч, ядовит
Пиколиновая кислота ---1* 5,4 Сильно поглощает в
УФ-свете
Янтарная кислота ---3 5,64
Гистидин + 1* 6,0 Образует прочные
комплексы с Ме*+
N-Морфолиноэтансульфокислота --- 1* 6,15
(МЭС)
Бис (2-гидроксиэтил) имино-трис (гидр- + 1 6,5
оксиметил) метан (бис-трис)
N- (2-ацетамидо) -2-аминоэтансульфо- ---I* 6,9
кислота (АЦЭС)
Имидазол + 1 6,95 Образует комплексы
с iMe2+
Фосфат ---3 7,20 Стабилизирует мно
N-Морфолинопропансульфокислота ---1* 7,2
(МОПС)
Ы-Трис(гидроксиметил)метил-2-ами- ---I* 7,5
ноэтансульфокислота (ТЭС)
Трпэтаноламин +1 7,75
Трис(гидроксиметил)аминоме- +1 8,06
тан(трис)
Ы-Трис(гидроксиметил)метилглицин --- 1* 8,15
(трицин)
Трис(гидроксиметил) аминопропан- ---1* 8,4
сульфокислота (ТАПС)
2-Амино-2-метил-1,3-пропандиол +1 8,8
Диэтаноламин +1
Таурин -I* 9,1
Аммиак +1 9,25 Летуч
Борная кислота ---1 9,23 Образует комплексы
со многими угле
водами
Этаноламин +1 9,5
Глицин ---1* 9,8
1 - Аминопропан-З-ол +1 9,95
Карбонат ---3 10,3
* Цвиттерионный буфер в кислотной или оснбвной форме.