Сельскохозяйственная биотехнология - Шевелуха Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Таблица 4.9. Характеристика генераций эмбрионов после Пересадки ядер эмбриональных клеток крупного рогатого скота
Генерации транс Число ооцитов со Число эмбрионов, Среднее число кле
плантированного слившимися мем развившихся до ток в результате
ядра бранами стадии морулы- трансплантации
бластоцисты ядра
Нулевая 584/887 (66) 84/417 (20) 27.5
Первая 576/961 (60) 63/610(10) 27.5
Вторая 230/441 (52) 49/255 (19) 35,4
Третья 67/124 (54) 8/68 (12) Не подсчитано
Примечание. В скобках приведены значения в процентах.
Осложняет пересадку ядер эмбриональных клеток получение телят с большой живой массой примерно на 15—20% больше, чем у контрольных животных. Это приводит к тяжелым родам (рождению мертворожденных телят, задержке выхода последа).
Пересадка ядер эмбриональных клеток в энуклеированные яйцеклетки имеет много преимуществ по сравнению с технологией разделения эмбрионов. Эти преимущества следующие: отдельные эмбриональные клетки, полученные из эмбриона на стадии до 64 клеток, могут быть репрограммированы в одноклеточные зиготы и давать множественные копии генетически одинаковых животных;
повторное клонирование путем пересадки ядер от клонированных эмбрионов повышает потенциальные возможности технологии в производстве большего числа клонов;
определение пола эмбриона может быть включено в схему клонирования, что позволит всем клонам иметь пол, установленный для первоначального эмбриона;
эмбрионы, полученные от различных генетических линий, могут быть заморожены и размножены после тестирования клона на продуктивность и иметь высокую экономическую ценность.
Еще более перспективным может стать использование эмбриональных стволовых клеток в получении клонированных сельскохозяйственных животных. Эмбриональные стволовые клетки — это плюропотентные клетки, выделенные из эмбрионов. Они проявляют пролифирацию в культуре и сохраняют способность к дифференциации в условиях in vitro и in vivo. Наиболее яркий пример их дифференциации in vivo — это инъецирование в бластоцель бластоцисты. При этом развивается химера с тканями как от эмбриона-хозяина, так и из стволовых Клеток. В 1981 г. две лаборатории независимо друг от друга со-
общили о том, что плюропотентные клетки (т. е. эмбриональные стволовые клетки) могут быть выделены и прокультивированы непосредственно из бластоцист мыши. Схема получения стволовых эмбриональных клеток следующая. После оплодотворения ооцита спермиями зигота проходит цикл делений, формируя морулу, которая затем переходит в бластоцисту. Внутренняя клеточная масса бластоцисты может быть удалена и помещена на культивирование для получения линии стволовых эмбриональных клеток. Эмбриональные стволовые клетки могут быть использованы для решения различных генетических целей и затем возвращены в бластоцисту донора для создания, например, трансгенного животного. Кроме того, эмбриональные стволовые клетки могут служить в качестве источника ядер-доноров для инъекции в энуклеированные ооциты при получении клонированного (идентичного) потомства.
Несмотря на потенциальные возможности использования эмбриональных стволовых клеток в исследованиях по изучению развития эмбриона и для получения трансгенных животных, е настоящее время эмбриональные стволовые клетки получены только из эмбрионов мышей и хомячков. Было показано, чтс только эмбриональные стволовые клетки мыши способны обеспечить получение половых химер. Вместе с тем известны единичные сообщения о получении изолированных клеток из внутренней клеточной массы бластоцисты у свиней, овец и крупного рогатого скота. Однако пока не установлено, являются ли эти клетки, полученные от сельскохозяйственных животных, плюро-потентными и недифференцированными и можно ли их поддерживать в культуре тканей.
Межвидовые пересадки эмбрионов и получение химерных животных. Принято считать, что успешная пересадка эмбрионов может быть осуществлена только между самками одного вида. Пересадка эмбрионов, например, овец козам и наоборот сопровождается их приживляемостью, но не завершается рождением потомства. Во всех случаях межвидовых беременностей непосредственной причиной абортов является нарушение функции плаценты, по-видимому, за счет иммунологической реакции материнского организма на инородные антигены плода.
Эта несовместимость может быть преодолена получением химерных эмбрионов с помощью микрохирургии.
Сначала были получены химерные животные путем объединения бластомеров из эмбрионов одного вида. С этой целью получали сложные химерные эмбрионы овец объединением 2-, 4-, 8-клеточных эмбрионов. Каждый сложный объединенный эмбрион состоял из равного числа бластомеров эмбрионов от 2—8 244
родителей. При этом общее число клеток колебалось от четырех- до восьмикратного увеличения нормального числа клеток. Эмбрионы вводили в агар и переносили в лигатированные яйцеводы овец для развития до стадии ранней бластоцисты. Нормально развивающиеся бластоцисты пересаживали реципиентам и получили живых ягнят, большинство из которых оказались химерными по данным анализа крови и внешним признакам.
