Сельскохозяйственная биотехнология - Шевелуха Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Технология трансплантации эмбрионов включает такие основные звенья, как вызывание суперовуляции, искусственное осеменение донора, извлечение эмбрионов (хирургическое или нехирургическое), оценка их качества, кратковременное или длительное хранение и пересадка.
Стимуляция суперовуляции. Самки млекопитающих рождаются с большим (несколько десятков и даже сотен тысяч) чис-
лом половых клеток. Большинство из них постепенно погибает в результате атрезии фолликулов. Только небольшое число примордиальных фолликулов переходят в антральные в процессе роста. Однако практически все растущие фолликулы реагируют на гонадотропную стимуляцию, которая приводит их к конечному созреванию. Обработка самок гонадотропинами в фолликулярной фазе полового цикла или в лютеиновой фазе цикла в сочетании с индуцированием регрессии желтого тела простаг-ландином Ф2(ПГФ.2а) или его аналогами приводит к множественной овуляции или так называемой суперовуляции. Установлено, что от гормонально обработанных доноров можно получить в среднем в 10 раз больше беременностей, чем от необработанных животных.
Крупный рогатый скот. Индукцию суперовуляции у самок крупного рогатого скота проводят обработкой гонадотропинами, фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ) или сывороткой крови жеребой кобылы (СЖК), начиная с
9—14-го дня полового цикла. Через 2—3 дня после начала обработки животным вводят простагландин Ф2а или его аналоги, чтобы вызвать регрессию желтого тела.
Проведены многочисленные испытания разных схем гормональной обработки коров и телок с целью индукции полиовуляции. Наиболее широко в этих целях используют СЖК в дозе
2,5—3,0 тыс. ИЕ. Известно, что период полужизни эндогенного СЖК у кобыл, установленный гистеректомией, составляет около 6 дней, а при использовании радиоиммунологического метода выявлено наличие двух комплексов в СЖК — один с периодом полужизни 40,0—51,2 ч, второй— 118,4—129,4 ч.
Это свойство СЖК позволяет ограничиться однократным введением его животным при вызывании суперовуляции и вместе с тем может иметь отрицательный эффект вследствие длительного действия на функцию яичников не только в период, предшествующий охоте, но и после нее. Это приводит к нарушению нормального уровня половых гормонов и особенно их соотношения в организме животных.
Для устранения этого нежелательного свойства СЖК в последнее время применяют антитела к гонадотропину с целью увеличения числа и улучшения качества эмбрионов, полученных при суперовуляции.
Введение во время охоты коровам, обработанным 3000 ИЕ СЖК на 10-й день цикла и 37,5 мг ПГФ.2 на 12-й день, моноклональных антител или овечьей антисыворотки к СЖК уменьшило число неовулировавших фолликулов (1,7 и 2,7 против 6,5 фолликула в контроле) и повысило оплодотворяемость (92 и 216
80% против 60% в контроле). Уровень эстрогенов в крови коров резко понижался вскоре после введения антисыворотки и оставался низким до извлечения эмбрионов, тогда как у контрольных животных уровень эстрогенов не снижался до базального уровня во время охоты и снова увеличивался после охоты (Дж. Мауэрт и др., 1985).
Для стимуляции полиовуляции у коров наряду с СЖК применяют гипофизарные гонадотропины. С этой целью используют очищенный ФСГ отдельно или в сочетании с Л Г. В отличие от СЖК препараты ФСГ и ЛГ вводят не однократно, а дважды в день в течение 4—5 сут.
Наиболее распространенная схема гормональной обработки коров-доноров, применяемая в коммерческих целях, представлена в табл. 4.1. При этом охота наступает через 40—50 ч после первой инъекции ПГФ2а. Осеменение проводят через 12 и 24 ч после наступления охоты. Эмбрионы извлекают нехирургическим способом через 7—7,5 дня после осеменения.
Таблица 4.1. Схема обработки коров гонадотропинами (по В. Хансел, Б.А. Хнлва, 1985)
День ФСГ-Р П ГФ2„
доза, мг время суток,ч доза, мг время суток, ч
1 6 7; 18 _ ---
2 4 7, 18 --- ---
3 2 7; 18 10 7
4 2 7; 18 12 12; 18
В связи с тем, что сроки овуляции у гормонально обработанных животных увеличиваются, изменяется и технология их осеменения. Первоначально рекомендовалось многократное осеменение коров с использованием нескольких доз спермы. Обычно вводят 50 млн живых сперматозоидов в начале охоты и через 12—20 ч осеменение повторяют. Более детальное изучение этого вопроса показало, что высокая эффективность оплодотворения может быть достигнута и при использовании одной дозы семени, если ее вводить через 24 ч после начала охоты.
Как видно из табл. 4.2, применение одной дозы семени через 24 ч после начала охоты у коров обеспечивает такой же уровень оплодотворяемости (87,2% против 78,0 и 90,0%) и выход эмбрионов, пригодных для пересадки (65,1% против 60,6 и 75,7%), как и осеменение двумя дозами семени через 12 и 24 ч после начала охоты. При использовании дорогостоящей спермы от высококачественных быков-производителей этот фактор имеет большое значение.
