Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 9

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 171 >> Следующая

1976; Allen, 1978; Righetti et al., 1979), сравнительный анализ
методических аспектов ИЭФ, электрофореза и изо-тахофореза (Chrambach,
1980), последние достижения в развитии метода (Righetti et al., 1980
а,b), применение- зимограмм (Wadstrom, Smyth, 1973) и использование рН-
маркеров при ИЭФ (Bours, 1973 d). С анализом методологии ИЭФ можно также
ознакомиться в соответствующих разделах общих руководств по биохимическим
методам разделения (Morris, Morris, 1976; Leaback, Wrigley, 1976).
Определенный интерес представляют сводные таблицы (Righetti, Caravaggio,
1976; Righetti et al., 1981 а), включающие перечень физико-химических
характеристик более чем 1200 ферментов и структурных белков прокариот и
эукариот. Приведены значения pi (полученные на основании ИЭФ), а также
молекулярные массы целых белков и отдельных субъединиц. Во всех случаях
указан вид организма-продуцента, а в случае эукариотических белков -
орган и внутриклеточная локализация. Таблицы охватывают данные,
появившиеся в литературе с момента возникновения ИЭФ (около 1966 г.) по
1979 г., и могут служить весьма полезным справочным пособием для
специалистов в области химии белков.
1980 год был ознаменован рождением Электрофоретического общества
(Electrophoresis Society) с его официальным органом - журналом
Electrophoresis (издательство Verlag-Chemie). По-видимому, именно в этом
журнале будет публиковаться большинство работ, связанных с новыми
методическими аспектами и применением ИЭФ. Существуют и некоторые другие
издания, где можно найти соответствующие работы: Journal of Biochemical
and Biophysical Methods (Elsevier), Analytical Biochemistry (Academic
Press) и (в меньшей степени) J. Chromatography (Elsevier). Можно отметить
также полезное периодическое библиографическое издание Acta Ampholinae,
публикуемое . LKB Produkter АВ. Выпущен сводный том по литературе с I960
по 1974 г.; каждый год выходят дополнения, охватывающие библиографию по
ИЭФ и изотахофорезу. Как уже упоминалось, к моменту подготовки настоящей
монографии (конец 1981 г.); насчитывалось более 4500 публикаций,
посвященных ИЭФ.
1.5. Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
В этом разделе приведены основные уравнения, описывающие процесс ИЭФ. С
более подробным математическим описанием можно познакомиться в ранних
работах Свенссона (Svensson, 1961, 1962 а, b), а также в позднейших
публикациях, посвященных анализу и дальнейшему развитию теории ИЭФ
(Rilbe, 1971,
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
27
1973 а, 1976; Almgren, 1971; Giddings, Dahlgren, 1971). Хотя отдельные
положения этой теории в дальнейшем были в значительной мере пересмотрены
(особенно в том, что касается нарушения стационарности при ИЭФ в геле, а
также несоблюдения принципа монотонности градиента pH, электропроводности
и буферной емкости), до сего дня не предложено никаких альтернативных
концепций и теория Рильбе (Свенссона) не утратила своего
основополагающего значения.
1.5.1. Искусственный градиент pH
Градиенты pH, образующиеся вследствие диффузии в электрическом поле
неамфотерных буферов с различными исходными значениями pH (Kolin, 1954,
1955, 1958), были названы "искусственными" (Svensson, 1961). Градиенты
такого типа неустойчивы и в процессе электромиграции и диффузии ионов
непрерывно изменяются. Как уже упоминалось, наиболее благоприятные
условия разделения достигаются в случае пары буферных растворов с
одноименными ионами, например двух ацетатных буферов с разными исходными
значениями pH, перекрывающими область значений pi разделяемых
компонентов. При фракционировании в подобных искусственных градиентах
можно ожидать лишь квазистационарного распределения амфотерных молекул.
1.5.2. Естественный (равновесный) градиент pH
В начале 60-х годов впервые была сформулирована концепция "естественного"
градиента pH, положенная в основу теории метода ИЭФ в его современном
виде (Svensson, 1961). Такой градиент, формируемый непосредственно под
действием электрического поля, в отсутствие конвекции должен оставаться
неизменным длительное время. Это значит, что ИЭФ может считаться истинно
равновесным методом разделения. Аналогичный принцип, как уже упоминалось,
лежит в основе метода равновесного (изопикнического) центрифугирования в
градиенте плотности. Было показано, что формулы, с помощью которых
определяются некоторые параметры, в том числе разрешающая способность,
для обоих методов имеют аналогичный вид (Giddings, Dahlgren, 1971).
Свенссон предсказал, что устойчивый градиент pH удастся получить за счет
изоэлектрического распределения широкого спектра амфолитов-носителей по
длине колонки. Под действием электрического поля амфолиты должны
распределяться по принципу возрастания pi от анода к катоду. Тогда
значение pH на любом участке градиента должно определяться только
буферной емкостью и электропроводностью
28
Глава 1
амфолита, который находится на данном участке градиента в своем
изоэлектрическом состоянии. Следует отметить, что на устойчивость
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed