Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 50

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 44 45 46 47 48 49 < 50 > 51 52 53 54 55 56 .. 171 >> Следующая

трубка с внутренним диаметром 3 мм, охлаждаемая водой и вращающаяся
вокруг своей оси со скоростью 40 об/мин. Вращение препятствует
конвекционному перемешиванию жидкости в трубке (см. подпись к рис. 2.12).
Внутренняя поверхность трубки покрыта слоем метилцеллюлозы, устраняющим
электроосмотические эффекты. Регистрация зон осуществляется прямым
сканированием в УФ-свете, при этом записывается отношение поглощения при
280 и 320 нм, что позволяет свести к минимуму искажения, связанные с
небольшими флуктуациями поглощения материала трубки, с загрязнениями на
ее поверхности или в охлаждающей жидкости и т.д. "Прокладки" из
гранулированного полиакриламида, расположенные по обоим концам трубки,
предохраняют находящийся в ней раствор амфолинов от перемешивания с ано-
<в)
(Г)
Рис. 2.12. Электрофорез в свободной жидкости. Проиллюстрирован принцип
стабилизации зон благодаря вращению горизонтально расположенной
электрофоретической трубки (1) вокруг длинной оси. А - элементарный объем
жидкости, плотность которого выше, чем плотность рабочего буферного
раствора. Если на этот объем в системе действуют только силы тяжести и
трения, то его движение всегда будет направлено вниз. Это значит, что
объем А будет удаляться от стенки, находясь в верхней половине сечения
трубки (а), и приближаться к стенке, попадая в нижнюю половину сечения
(б). Таким образом, из-за вращения трубки объем А будет попеременно то
приближаться, то удаляться от стенки, что и соответствует стабилизации
зоны. Если вращение прекратится, то четкая электрофоретическая зона Z,
изображенная на продольном сечении (в), быстро начнет "оседать" и
размываться (г). (Hjerten,
1967.)
124
Глава 2
литом и католитом. Концы трубки закрыты диализной пленкой.
Обзор по применению электрофореза и ИЭФ в свободной жидкости опубликован
Bours, 1976.
2.1.11. Многокамерные электролизеры
Как уже упоминалось, Рильбе и его сотрудники продолжили поиски в области
традиционного стационарного 'электролиза с целью усовершенствования
конструкции многокамерного аппарата (см. обзоры Svensson, 1948, и Rilbe,
1970). В 1974 г. в Милане Рильбе представил три новые разработанные им
модели электролизеров: одну модель с открытыми ячейками, внутренней
системой охлаждения, без перемешивания; вторую - с закрытыми ячейками, с
системой внешнего охлаждения, с перемешиванием и третью, наиболее
совершенную модель, сочетающую в себе большинство качеств хорошего
электролизера. Конструктивные особенности последней модели позволяют
успешно разрешить основную часть проблем стационарного электролиза, в
частности, связанных с рассеянием тепла, электроосмосом, гомогенностью
рабочего раствора во всех отсеках, сбором фракций без перемешивания
сфокусированных компонентов. Весьма вероятно, что электролизеры этого
типа удастся использовать для эффективного крупномасштабного
фракционирования белков. Полное время стационарного электролиза в этом
аппарате сокращено до 24 ч. Рабочий объем такого 20-камерного
электролизера обычно составляет 500-1000 мл. Можно работать с достаточно
высокими концентрациями белка - около 4-5%. Это означает, что "пропускная
способность" аппарата достигает нескольких граммов белка в сутки. Этот
подход, судя по всему, обладает существенными преимуществами по сравнению
с другими препаративными приемами, основанными на применении градиента
плотности (Rilbe et al., 1975).
В работе Jonsson, Rilbe, 1980, описана еще одна усовершенствованная
модель электролизера, позволяющего фракционировать граммовые количества
препарата. Аппарат состоит из 46 отсеков, разделенных мембранами. Полный
рабочий объем - около 7,6 л, длина 1 м. Охлаждение и перемешивание
жидкости внутри отсеков достигается за счет медленного вращения аппарата,
помещенного в охлаждаемую камеру. Фракционирование происходит в течение
2-3 сут при напряжении до 5 кВ. Устройство всего аппарата, а также
отдельно одного электродного отсека и примыкающей к нему разделительной
ячейки показано на рис. 2.13, A Yi Б. С помощью этого электролизера
удалось полностью разделить 14 г сывороточного белка на основные
компоненты - сывороточный альбумин (pi 4,60), а-лактальбу-мин (р! 5,01) и
р-лактоглобулин (р! 5,13-5,23). Впрочем, мне
16
Рис. 2.13. А, Поперечный (а) и продольный (б) разрезы многокамерного
электролизера. Основные узлы:
1 - камера охлаждения, 3 - рефрижераторная установка, 4 - разделительная
камера электролизера, 7 - четыре крепежных стержня, фиксирующие
разделительную камеру между* двух торцевых колец (8), 10 - электромотор,
вращающий разделительную камеру электролизера через систему червячной
передачи (9 и И),
13 - опорная рама, 14 - подшипники, 15 -газоотводные трубки. Б. Участок
электролизера, примыкающий к одному из электродных отсеков (продольный
разрез). 1-газоотводная трубка, соединенная через канал (2) с электродным
отсеком (5), 3 -платиновая проволока, ведущая к элек-троду (4), б -
мембрана, препятствующая попаданию пузырьков выделяющегося газа в
Предыдущая << 1 .. 44 45 46 47 48 49 < 50 > 51 52 53 54 55 56 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed