Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 45

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 171 >> Следующая

устройство колонок этого типа было описано в работе Brakke et al., 1968.
Используемый метод сканирования отличается от метода, предложенного в
работе Catsimpoolas, 1973 с, который позволяет непосредственно
регистрировать профиль поглощения в колонке, не отключая тока, т. е. не
прерывая процесса ИЭФ. Использование такого подхода, получившего название
"предстационарное ИЭФ" (transient state IEF), дает ценную информацию о
кинетике изоэлектрического фракционирования (Catsimpoolas, 1973с-f)*
Применение колонок фирмы ISCO для препаративного ИЭФ было впервые описано
в работе Grant, Leaback, 1970. С подробным обзором методических аспектов
использования таких колонок можно ознакомиться в публикации Leaback,
Wrigley, 1976.
В работе Fawcett, 1975 с, было отмечено, что аналогичные эксперименты
можно проводить на значительно более простой аппаратуре. Например, автор
сконструировал модификацию U-образной ячейки с кварцевой колонкой в одном
(разделительном) колене и трехходовым краном в нижней части ячейки. Кран
предназначен для регуляции процессов заполнения и опорожнения колонки. В
разделительном колене смонтирована также рубашка водяного охлаждения. Для
опорожнения колонки удаляют верхний электрод и вытесняют градиент. через
верх, закачивая в нижнюю часть кварцевой трубки плотный раствор сахарозы.
Головку детектора Uvicord II закрепляют в верхней части колонки, что
позволяет регистрировать профиль УФ-по-глощения в ходе элюции. Фракции
поступают в коллектор через адаптер из силиконовой резины, присоединенный
к верхнему выходу колонки. В той же работе (Fawcett, 1975 b) предложена
конструкция аппарата, состоящего из двух или трех U-образных трубок.
Аппараты такого типа можно применять для ИЭФ, сопровождающегося
преципитацией образца или в случае загрязнения сфокусированных зон за
счет очень высокого содержания примесей. В соответствующих местах ячеек
расположены специальные краны, через которые можно легко извлекать
сфокусированные компоненты. Охлаждение обычно осуществляется просто
погружением аппарата в резервуар с охлажденной жидкостью.
2. U3. Система Poly-Prep 200
В работе Catsimpoolas et al., 1980, описано применение системы Poly-Prep
200 производства американской фирмы Buchler Instruments (Fort Lee, New
Jersey) для изоэлектрического фракционирования. Конструкция аппарата
показана на рис. 2.5, Л.
Рис. 2.5. Устройство системы Poly-Prep 200 (фирма Buchler Instruments).
Л. Схематическое изображение аппарата в рабочем состоянии. 1-к коллектору
фракций, 2 - охлаждение (вход), 3 - охлаждение (выход) , 4 - верхний
буфер (вход),
5 - электрод, 6 - верхний буфер (выход), 7 - охлаждение (выход), 8 -
верхний буфер,
9 - разделительная колонка,
10 -г- образец, 11 - сахарозный градиент плотности, 12 - охлаждение
(вход), 13 -вытесняющий тяжелый раствор (вход), 14 -тяжелый раствор 1б
(подложка), 15 -пористый стеклянный фильтр, 16 - нижний буфер (выход), 17
-нижний буфер, 18 - электрод, 19 - нижний буфер (вход). В. Этапы процесса
ИЭФ в градиенте плотности. Стрелками указано направление потока жидкости,
кружками - рабочее положение кранов - открытое (О)
или закрытое (ф).
Мембрана
Заполнение Фокусирование
"JP-----------
Слив электролитов
Сбор фракций
Б
Препаративное ИЭФ
Он состоит из четырех узлов - разделительной колонки, внутренней
стеклянной трубки системы охлаждения и двух нижних электродных отсеков,
выполненных из оргстекла. В собранном виде стеклянная разделительная
камера имеет систему охлаждения как с внутренней, так и с наружной
стороны. Рабочее-пространство колонки в форме кольца, заключенного между
поверхностями двух концентрических цилиндров, имеет площадь поперечного
сечения 17,6 см2. Разделительная камера отделена от нижнего электродного
отсека жесткой мембраной из пористого стекла. Рабочие растворы поступают
через входное-отверстие в нижней части колонки. Выход растворов из
колонки осуществляется через тонкую трубку, смонтированную по центру,
вдоль вертикальной оси, в рубашке внутреннего охлаждения. По окончании
разделения с помощью вытесняющего плотного раствора градиент (начиная
снизу) выкачивают из колонки через эту трубку и подают на коллектор
фракций.
Исходно аппарат был сконструирован для препаративного электрофореза в
геле (Jovin et al., 1964). Процесс ИЭФ в нем включает четыре этапа,
которые схематически показаны на рис. 2.5,5; а - формирование градиента
плотности, внесение образца и заполнение электродных отсеков; б -
фокусирование; в - слив нижнего электролита (анолита) и промывание нижней
камеры; г - сбор фракций с использованием вытесняющего-раствора.
Сообщалось о применении этой системы для выделения нуклеозидфосфорилазы
из эритроцитов.
2.1.4. Колонки Свенссона (Рильбе)
Помимо колонок, выпускаемых фирмой LKB (Svensson,. 1962 b), Свенссон
(Рильбе) и его коллеги разработали вертикальные колонки другой
конструкции, а также усовершенствовали конструкцию горизонтального
многокамерного электролизера. В 1973 г. в Глазго Рильбе сделал сообщение
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed