Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 4

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 < 4 > 5 6 7 8 9 10 .. 171 >> Следующая

работе было показано, что при продолжительном электролизе достигается
стационарное распределение концентраций электролитов и устанавливается
равновесие между процессами электромиграции и тепловой диффузии. Ти-
зелиус так описывал свои опыты: "Амфолит (помещенный в мультимембранный
электролизер) отталкивается и от анода, и от катода, поскольку кислые
растворы придают ему положительный заряд, а щелочные - отрицательный.
Вследствие этого* амфолит будет перемещаться до тех пор, пока не "отыщет"
один или несколько отсеков с pH, равным его pi, где и останется все то
время, пока идет процесс электролиза... Таким образом, в стационарном
состоянии все анионы (в форме соответствующих кислот) располагаются в
отсеках, примыкающих к аноду, все катионы (в форме гидроксидов) - в
отсеках, примыкающих к катоду, а амфолиты - в промежуточных отсеках, при
значениях pH, соответствующих их pi... Использование этого принципа для
разделения амфолитов должно давать ряд существенных преимуществ. В
частности, при миграционном фракционировании обычно трудно избежать
значительного раз-
, Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
15
¦бавления компонентов, поскольку, как правило, передний фронт зоны
мигрирует быстрее заднего вследствие так называемых "граничных
искажений". В то же время описанный выше метод должен обладать
концентрирующим эффектом по отношению к каждому йз разделяемых
компонентов".
Чем же объясняется тот факт, что, хотя уже к 1941 году изоэлектрическое
фракционирование, казалось бы, достигло определенных успехов,
понадобилось еще целых 25 лет, прежде чем появилась возможность говорить
об истинном рождении метода ИЭФ? Одно из объяснений, по-видимому, связано
с явлением, которое Колин образно охарактеризовал как "дефокусирование,
или размывание идейных истоков. Этот процесс сводится к невольному
искажению исторической перспективы и -обычно принимает форму перенесения
реального приоритета новых идей и открытий на некие другие (как правило,
множественные) источники в отдаленном прошлом" (Kolin, 1977). В самом
деле, те первые успехи в области электролиза амфоли-тов не смогли
привести к современному изоэлектрофокусированию, поскольку тогдашние
эксперименты лишь "скользнули" по поверхности этой обширной и глубокой
области исследований. Следующий шаг в развитии методологии был сделан
самим Колином в 1954-1955 гг. (Kolin, 1954, 1955 а, b, 1958, 1970). Он
разработал принцип "фокусирования ионов в непрерывном градиенте pH" со
стабилизацией градиентом плотности раствора •сахарозы. Для описания
характера распределения веществ, который реализуется в процессе
фокусирования, им был предложен термин "изоэлектрический спектр".
Формирование градиента pH достигалось благодаря диффузии буферных
компонентов в электрическом поле; разделяемые вещества помещались на
границе раздела между кислым и щелочным буфером в приборе типа аппарата
Тизелиуса. В подобных "искусственных" градиентах pH Колину удавалось
получать наборы изоэлектриче-¦ских линий красителей, белков, клеток,
микроорганизмов и вирусов за промежутки времени от 40 секунд до
нескольких минут, т. е. с быстротой, для электрофоретических процессов и
до сих пор немыслимой. В разделяющей ячейке Колина градиенту pH
сопутствовали градиенты плотности, электропроводности и вертикальный
температурный градиент. Конструкция ячейки, приведенная на рис. 1.1,
свидетельствует о том, что сам метод ¦был по тем временам весьма
совершенным. Из плексигласового блока была изготовлена U-образная ячейка
с электродными камерами, расположенными достаточно далеко от рабочего
пространства, в котором происходило фракционирование (один из электродов
показан на рисунке слева). В обе съемные плексигласовые стенки спереди и
сзади были вмонтированы стеклянные или кварцевые окошки, позволяющие
следить за ходом
Рис. 1.1. Устройство ячейки для электрофоретического фракционирования,
Т*, Ть, Тс и. Td- иглы для подкожных инъекций. Du IV, D2 и D* - соответ-
ветствующие горизонтальные отводы. (Kolin, 1958.)
разделения в левом колене. В этом же колене, в котором, как правило, и
проводилось фракционирование, были расположены капилляры Db D' и D" для
внесения образцов и отбора фракций по окончании процесса разделения.
Первоначально эти капилляры были закреплены неподвижно на определенной
высоте, что затрудняло извлечение компонентов, продвинувшихся на
значительное расстояние от точки нанесения. Впоследствии Колин
сконструировал усовершенствованную модель (рис. 1.2), включив в нее
плунжер-отборник. Перемещаясь в вертикальном направлении, плунжер мог
опускаться вниз по левому колену ячейки, что позволяло отбирать фракции
по всему рабочему объему. Это давало и дополнительное преимущество,
связанное с тем, что при погружении плунжера уровень жидкости в колене
поднимался, в результате чего разрешение разделяемых компонентов
увеличивалось пропорционально отношению площадей исходного и конечного
сечений.
Весьма совершенной была и система оптической регистрации разделяемых
Предыдущая << 1 .. 2 3 < 4 > 5 6 7 8 9 10 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed