Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 32

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 26 27 28 29 30 31 < 32 > 33 34 35 36 37 38 .. 171 >> Следующая

то можно вспомнить, что, согласно расчетам Charlionet et al., 1981,
предложенный ими способ синтеза позволяет получать амфолиты, которые
только в диапазоне pH 4,3-5,0 (т. е. шириной всего 0,7 ед. pH) содержат
более 4000 компонентов с разными значениями pi и р/С. Здесь, пожалуй,
следует поставить точку, пока числа еще не достигли подлинно
астрономических масштабов.
1.10.7. Хелатирующие свойства
О том, что амфолиты-носители способны хелатировать ионы металлов,
известно уже давно (Davies, 1970), однако количественные характеристики
этого явления долгое время оставались неизученными. Было найдено, что в
образовании комплекса с ионами металлов участвуют обычно две соседние
азотсодержащие функциональные группы амфолитов, при этом образуются
пятичленные циклы (Galante et al., 1975). Оптимум хелатообра-зования
находится в области pH 8,5-10,5, где многие аминогруппы депротонированы.
Формирование комплексов смешанного типа по азоту и карбоксильной группе
хотя и возможно, но менее выгодно, поскольку образующийся при этом
семичленный цикл менее стабилен. Хелатообразование с участием только
одних карбоксильных групп, т. е. с образованием двенадцатичленных циклов,
маловероятно.
Хелатирующие свойства по отношению к большинству ионов металлов у
амфолинов выражены слабее, чем у ЭДТА. Для образования комплекса с
двухвалентными катионами типа Mg2+, Са2+, Zn2+ (за исключением Си2+)
требуется, как правило, (100-500)-кратный молярный избыток амфолитов, в
то время как ЭДТА обычно связывает металлы в диапазоне pH 3-11 при
молярном соотношении 1:1. По отношению к ионам Си2+ амфолиты-носители,
так же как и ЭДТА, являются сильными хелатирующими агентами. Поэтому ИЭФ
многих медьсодержащих белков может сопровождаться их быстрой
инактивацией.
Недавно мне удалось найти в химической литературе данные, которые ранее
нам не были известны, но которые полностью подтверждают полученные нами
результаты. Так, согласно
6-1488
82
Глава 1
Таблица 1.5. Константы связывания для стехиометрических (1:1) комплексов
тетраминов с нонами меди (11)*>
Лиганды Логарифм кон-
станты связы- Температура, °С
вания, л/моль
имО'
С' )
HN^HNX
Голубой
леке
Красный
леке
NT(CH*)aNH*h
NH2 (СН2) 3NH (СН2) aNH (СН2) 3NH2
Nr(CH2bNH2l3
Т4Н2 (СН2) 2NH (CH2)2NH (СН2) 2nh2 NH2 (СН2) 2NH (СН2) 3NH (СНа) 2NH2
Макроцикли-ческие
комп- 20
комп- 28
Ациклические
13.1 17,3 18,8
20.1 23,9
25
25
25
20
20
25
25
*) По Christensen et al., 1971.
Christensen et al., 1971, линейные, разветвленные или циклические
полиамины действительно являются сильными комплексо-нами по отношению к
ионам Си2+. В табл. 1.5 приведены значения логарифма константы связывания
меди для набора тетраминов различной структуры. Считают, что в случае
циклических тетраминов ион меди точно входит внутрь кольца так, что
четыре более или менее эквивалентных атома азота координируются в одной
плоскости вокруг центрального катиона Си2+. Все рассматриваемые полиамины
образуют с медью стехиометрические комплексы с молярным соотношением 1:1.
Необходимо отметить, что структура вестерберговых амфолитов-носителей, в
которых атомы азота, как правило, разделены двумя метиленовыми звеньями,
является оптимальной для связывания, ионов меди. Как видно из табл. 1.5,
соединения этого типа характеризуются значительно более высоким сродством
к металлу, чем соответствующие гомологи, в которых между атомами азота
находится цепочка из трех углеродных атомов. На сегодняшний день в
литературе отсутствуют сведения о хелатирую-щих свойствах сервалитов или
фармалитов.
Для сведёния к минимуму связывания ионов металлов при ИЭФ белки следует
вносить таким образом, чтобы их миграция происходила от анода к катоду. С
этой же целью имеет смысл вносить разделяемые белки в сформированный
заранее градиент pH, что позволит уменьшить время их контакта с
амфолитами. .Наиболее безопасным способом можно считать внесение белка
максимально близко к области его pi. К счастью, инактивация
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
8"
фермента за счет удаления металла редко бывает необратимой. Как правило,
удается полностью восстановить ферментативную активность, проводя после
ИЭФ инкубацию с необходимым количеством утраченного кофактора. Наиболее
существенная проблема, возникающая в связи с хелатирующими свойствами
амфолитов, заключается в образовании дополнительных зон, которые
соответствуют множественным формам белка с различным содержанием металла.
1.10.8. Биологическая токсичность
Эксперименты на животных и изучение цитотоксического эффекта in vitro
показали, что амфолины относительно безвредны (Wadstrom et al., 1974).
Присутствие амфолинов не искажает результаты тестов, основанных на
иммунодиффузии или ингибировании гемагглютинации. Амфолины с успехом
применяли для поддержания pH при работе с культурами тканей (Walther,
Schubert, 1974). Поскольку амфолины можно легко отделить от очищенных
белков и нет четких указаний на образование между ними прочных
Предыдущая << 1 .. 26 27 28 29 30 31 < 32 > 33 34 35 36 37 38 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed