Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 31

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 171 >> Следующая

поперечного сечения фокусирующей колонки, х - координата по направлению
тока [дс=0 в точке концентрационного максимума (с0) амфолита, х>0 при
отклонении от максимума в сторону катода], D - коэффициент диффузии
амфолита. Величина Р определяется уравнением (17). В случае, когда
электропроводность не постоянна, а является линейной функцией координаты
х, решение уравнения (1) принимает вид
Это распределение - асимметрично (г - ширина зоны). Таким образом,
концентрационный профиль амфолитов вблизи изоточки может соответствовать
гауссову или искаженному распределению. Несимметричное концентрационное
распределение при ИЭФ было обнаружено для довольно многих амфолитов-
носителей (Brown et al., 1977). С другой стороны, в работе Gelsema, De
Ligny, 1979, утверждается, что даже сильные изменения электропроводности
по длине фокусировочной колонки оказывают крайне малое влияние на
концентрационное распределение амфолитов вблизи pi и, таким образом, едва
ли могут быть причиной подобных искажений. Следовательно, наблюдаемое
искаженное распределение скорее всего вызвано негомо-генностью амфолита в
данной области или взаимодействием его с компонентами фокусирующей
системы, т. е. с другими амфо-литами или составляющими антиконвекционной
среды. Имеются определенные сведения и о взаимодействии амфолитов между
собой и с другими веществами, особенно с нейтральными детергентами,
такими, как нонидет NP-40 и твин 80, которые при ИЭФ добавляют для
солюбилизации мембранных белков (Gianazza et al., 1979а).
Другой аспект проблемы, также обнаруживающий некоторые противоречия,
связан с определением истинного линейного раз-
80
Глава 1
мера зоны индивидуального сфокусированного амфолита-носи-теля вдоль оси
разделительной колонки. В работе Brown et al., 1977, высказано
предположение о том, что в процессе фокусирования индивидуальные амфолиты
распределяются в виде очень широких зон, протяженность которых составляет
от 7 до 15% (преимущественно около 10%), а в отдельных случаях достигает
.40% от полной длины пути разделения. В справедливости такой точки зрения
можно усомниться, в частности, потому, что она основана на данных
ионообменной хроматографии, разрешающая способность которой не позволяет
обнаружить более 10-15% от общего числа индивидуальных компонентов, а
также на данных по распределению гистидина, который в процессе ИЭФ при
высокой загрузке агрегирует и преципитирует по всей длине колонки. С
другой стороны, многочисленные данные по ИЭФ растительных пигментов
(Jonsson, Pettersson, 1968), красителей (Righetti et al., 1977b),
свободных аминокислот (Catsim-poolas, 1973c), пептидов (Righetti,
Chillemi, 1978), а также результаты прямой регистрации картины
распределения амфолитов по изменению показателя преломления (Righetti et
al., 1975а; Rilbe, 1973b) или с помощью специальных красителей (Radola et
al., 1977) показывают, что даже низкомолекулярные амфолиты фокусируются в
виде очень узких зон. Несмотря на значительно более высокие, чем у
белков, коэффициенты диффузии, амфолиты-носители образуют зоны, ширина
которых, как правило (особенно при загрузках порядка нескольких
микрограммов), составляет от 0,1 до 0,5% длины колонки (Righetti, 1977).
В щелочной области градиента ситуация может быть несколько иной,
поскольку, как было показано в работе Gianaz-za et al., 1979a, эта
область характеризуется повышенным содержанием "плохих" амфолитов-
носителей. Распределение таких амфолитов вблизи изоточки может быть более
диффузным.
Наконец, еще один, последний аспект проблемы связан с общим числом
индивидуальных компонентов, входящих в состав каждого из трех видов
коммерческих амфолитов-носителей. По оценкам Вестерберга, предложенный им
способ синтеза позволяет получить более 360 изомеров и гомологов
(Vesterberg, 1973с). Это число можно увеличить, проводя дополнительно
метилирование или этилирование аминогрупп. С помощью ионообменной
хроматографии амфолинов pH 3,5-10 (фирмы LKB) удалось обнаружить только
62 разных компонента (Brown et al.,
1976). С другой стороны, при регистрации распределения амфолитов с
помощью формальдегида, лактозы или нингидрина после ИЭФ в слое сефадекса
G-75 только в рамках диапазона шйриной в 2 ед. pH было отмечено около 150
различных компонентов (Radola et al., 1977). Кроме того, ионообменная
хроматография амфолинов узкого диапазона (0,5 ед. pH) позволи-
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
St
ла обнаружить до 45 пиков. Судя по этим данным, амфолины pH 3,5-10 должны
содержать не менее 500 индивидуальных амфолитов. Действительно, по
свидетельству многих авторов и фирм-изготовителей, общее число
компонентов в препаратах амфолитов-носителей очень велико. Так, в работе
Soderberg et al., 1980, утверждается, что фармалиты содержат не менее
1000 различных компонентов на 1 ед. pH. Это означает, что фармалиты
широкого диапазона pH представляют собой необычайно гетерогенную смесь
более чем 6000 амфолитов. Если и это кому-нибудь покажется недостаточным,
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed