Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 30

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 24 25 26 27 28 29 < 30 > 31 32 33 34 35 36 .. 171 >> Следующая

сервалитов (Fredriksson, 1977а), а также всех трех типов коммерческих
амфолитов-носителей (Gelsema et al., 1978). По данным Fredriksson, 1977
а, буферная емкость сервалитов pH 2-11 в области градиента при pH<8 в
1,5-2,5 раза ниже, чем емкость в соответствующей области амфолинов pH
3,5-10. При рН>8,5 оба типа амфолитов-носителей обладают одинаковой
буферной емкостью. Для обоих градиентов минимальные значения емкости (5,2
мкэкв • pH-1 • мл-1 для амфолинови 1,8 мкэкв* pH-1*
• мл-1 - для сервалитов) обнаруживаются в районе pH 6,2. Эти данные,
полученные при ИЭФ 1%-ных растворов в сахарозном градиенте плотности,
хорошо согласуются со значением буферной емкости 6 мкэкв • pH-1 • мл-1,
определенным в работе Davies, 1970, для 1%-ного раствора амфолинов в
интервале pH 5-7.
Результаты, полученные при сравнении трех типов поступающих в продажу
амфолитов (Gelsema et al., 1978), можно считать наиболее достоверными,
поскольку фокусирование в этом случае проводилось в свободной жидкости
(без использования
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
77
к
2
30
20
10
J ИД I I I L
3 4 5 6 7 81 9 10
pH
Рис. 1.20. Зависимость буферной емкости от pH в градиентах pH, полученных
при фокусировании амфолинов (------), сервалитов (-) и фармалитов (•••)•
Данные фирмы Pharmacia о буферной емкости фармалитов представлены
ступенчатой линией. (Gelsema et al., 1978.)
сахарозного градиента) в спиральном полиэтиленовом капилляре (по Bours,
1976). Эти результаты представлены на рис. 1.20. Видно, что в области pH
5,5-8,2 фармалиты отличаются самой высокой и равномерной буферной
емкостью. Наихудшие буферные свойства в этом диапазоне проявляют
сервалиты. На участке градиента pH 3,5-5,5 наилучшими буферными
свойствами обладают амфолины, а при рН>8,5 и амфолины, и сервалиты
обладают более высокой буферной емкостью, чем фармалиты. На графике,
приведенном на рис. 1.21, показана рН-зависимость отношения молярной
буферной емкости (Вi) к электропроводности (хО во фракциях, полученных
после ИЭФ. Как известно,
а графический анализ показывает, что практически по всему градиенту pH,
особенно на участке pH 5,5-8,5, это отношение достигает наибольших
значений для фармалитов. Несколько меньшие значения характерны для
амфолинов, еще меньшие - для сервалитов. Таким образом, эти три кривые
согласуются с известным соотношением среднестатистических значений Мт
коммерческих амфолитов-носителей: Мг (серв.)<Мг (амф.)< <МГ (фар.).
Возможно, наиболее благоприятные буферные свойства фармалитов в области
pH 5,5-8,5 связаны с тем, что они обладают наибольшей молекулярной
массой. Это согласует-
(43)
78
Глава 1
pH
Рис. 1.21. Зависимость отношения В\/%\ от pH в градиентах pH, полученных
при фокусировании амфолинов (--------), сервалитов (----) и фармалитов (-
----).
Bi - молярная буферная емкость в изоэлектрическом состоянии, Xi -
электропроводность в изоэлектрическом состоянии. Отношение Bi/Xi
пропорционально кубическому корню из молекулярной массы. (Gelsema et al.,
1978.)
ся с гипотезой, высказанной в работе Charlionet et al., 1981 о том, что
фактором, ограничивающим разрешающую способность при ИЭФ, является Мг
амфолитов, формирующих данный градиент pH. Такого рода сопоставление
правомерно только в том случае, если амфолиты всех трех типов
характеризуются примерно одинаковым относительным содержанием
протолитиче-ских групп на единицу массы (см. также разд. 1.7.2 и 1.10.3).
Мне хочется привести еще одно сопоставление. Как мы видели ранее, у
фармалитов наблюдались наиболее высокие и равномерно распределенные
значения буферной емкости во всем интервале pH 5-8 и отсутствовал
характерный минимум электропроводности при pH около 6,2. О достаточно
высокой молекулярной массе компонентов диапазона pH 5-8 свидетельствовало
то, что при гель-фильтрации на биогеле Р-4 они элюировались со свободным
объемом (Gelsema et al., 1980а). С другой стороны, как отмечалось в разд.
1.10.3, начиная с 1980 г. фирма Pharmacia выпускает амфолиты с меньшими
значениями Мг. Последние данные говорят о том, что новые фармалиты уже
обнаруживают обычный минимум электропроводности (и соответственно
буферной емкости) в районе pH 6-6,5. Я склонен полагать, что это
обусловлено именно удалением высокомолекулярных компонентов. К сожалению,
фирма-изготовитель, которая могла бы сообщить нам более точные сведения о
своей продукции, предпочитает хранить молчание.
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
7"
1.10.6. Распределение амфолитов-носителей
при фокусировании.
Общее число индивидуальных компонентов
Исходя из общего дифференциального уравнения ИЭФ (1), описывающего
равновесие между электрофоретическим и диффузионным переносом массы в
стационарном состоянии, Свенссон вывел уравнение для концентрации С
амфолита, сфокусированного в линейном градиенте pH с неизменной удельной
электропроводностью хо (Svensson, 1961):
(-?L^_e*(-w)- (44)
Это - симметричное гауссово распределение, где i - сила тока, q - площадь
Предыдущая << 1 .. 24 25 26 27 28 29 < 30 > 31 32 33 34 35 36 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed