Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 27

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 171 >> Следующая

7 = (1/20) Самф-|- Сон в диапазоне pH 7 -11. (37)
В работе Gelsema et al., 1978, на основе теоретического анализа,
проведенного (Rilbe, 1976) для оценки величины ионной силы раствора
сфокусированных амфолинов, было получено следующее неравенство:
/ < (1/3) СамфЧ-(1/2)Сн. (38)
Исходя из средних Мг=700 и концентрации 15 мМ, предельное значение ионной
силы для сфокусированных 1,%-ных амфолинов в этой работе оценивалось
величиной 5 мг-ион/л. Это примерно в 10 раз выше, чем полученное мною
значение 7. Обращаясь ко мне в своем письме (13 мая 1980 г., Утрехт),
Гель-
сема отмечал, что, по его мнению, следует делать различие
между эффективным равновесным значением 7, которое проявляется на
определенном участке в процессе ИЭФ, и ионной силой во фракциях,
собранных по окончании ИЭФ. Он привел следующий расчет, исходя из
минимального значения электропровод-
70
Глава 1
Ионная сила, мг-ион/л
Рис. 1.18. Зависимость рГ эритроцитов от ионной силы среды. Расположение
точек 2-5 (слева направо) основано на электрофоретических данных,
приведенных в работе Seaman, 1975. Экстраполяция кривой, построенной по
этим точкам, до значения pi эритроцитов, определенного методом ИЭФ (Just
et al., 1979; McGuire et al., 1980), позволяет определить значение ионной
силы среды при ИЭФ. (Righetti, 1980.)
ности (х) сфокусированных амфолинов х=0.5*10-4 Ом-1-см-1 (по данным
Гельсема, согласованным с моими) и считая, что
X = FSCjZjM,. (39)
где F - постоянная Фарадея, щ - подвижность ионов с зарядом Z\ при
концентрации Сь На участке с pH 5-8, где ионы воды или электродных
растворов не дают заметного вклада в электропроводность, значение суммы
SciZi"i составляет
~ 0,5-10-8 (г-экв• Ом-1 • см-1 • Юг1). (40)
Поскольку в узком интервале pH во фракциях после ИЭФ 2| амфолитов может
принимать значения 0, +1 или -1, то Sc12iMi=Sc1Ki. Если мы предположим,
что все однозарядные амфолиты имеют примерно одинаковую подвижность (и),
то получим
2с(г= Scj"j = "Scj са 0,5 • 10-9 г-экв • Ом-1 • см-1 • Юг1. (41)
Подставляя в уравнение (41) найденное мною значение /=0,5 мМ, т. е. 0,5 •
10-6 моль/см3, получаем среднее значение
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
71
подвижности ы=10~3 см2"В-1 "с-1. Это значение явно завышено, поскольку
максимальная подвижность даже низкомолекулярных ионов, например ацетата и
бензоата, составляет лишь 0,4 • 10_3 и 0,3*10-3 см2*В-1*с-1
соответственно. Поэтому, по мнению Гельсема, для сфокусированных 1%-ных
амфолинов значение /=1-2 мг-ион/л представляется более правдоподобным.
1.10.2. Изоэлектрическая и изоионная (изопротонная) точки
Молекула амфолита по определению содержит более одной протолитической
группы, в том числе диссоциирующие группы и кислотного, и основного
типов. Для характеристики амфолитов наибольшее значение имеют два
родственных понятия - изоэлектрическая точка (pi) и изоионная точка, pi
определяется как значение pH, при котором электрическая подвижность
амфолита равна нулю. Изоионная точка - это значение pH, при котором
концентрация анионов равна концентрации катионов, т. е. суммарный заряд
амфолита равен нулю.
Экспериментальным путем изоионную точку определяют как значение pH
раствора амфолита, которое не изменяется при дальнейшем повышении его
концентрации. В математическом виде это означает, что
(42,
где С - концентрация данного амфолита, ас - концентрация сильной кислоты
или основания. Поскольку понятие "изоионная точка" по смыслу не совсем
соответствует этому уравнению, вместо него в работе Rilbe, 1973 а, было
предложено понятие "изопротонная точка". В многочисленных опытах по ИЭФ
было установлено, что значения изоэлектрической и изоионной
(изопротонной) точек амфолитов очень близки, поэтому в дальнейшем мы не
будем делать различий между этими понятиями. Это относится и к белкам,
поскольку при ИЭФ, как правило, не наблюдается взаимодействия между
белковыми зонами и буферными ионами (амфолитами-носителями; см. также
разд. 4.11). Тем не менее значение pi белка, установленное экстраполяцией
данных обычного электрофореза, в тех случаях, когда белок связывает
значительное количество ионов буфера, к нулевой подвижности и нулевой
ионной силе, может заметно отличаться от истинной изопротонной точки.
Многочисленные примеры, иллюстрирующие неадекватность такого подхода
(Сапп, 1966), свидетельствуют о том, что ИЭФ - это, вероятно,
единственный метод, позволяющий надежно определить pi белка (Righetti,
Caravaggio 1976; Righetti et al., 1981).
72
Глава 1
1.10.3. Молекулярная масса
Некоторые разногласия существуют в связи с определением истинного
значения молекулярной массы амфолитов. Различные группы исследователей
называют самые разные диапазоны значений Mr: 5000-7000 (Gierthy et al.,
1979); 800-1200 для сервалитов, 1000-6000 для амфолинов и 1000-15000 для
фармалитов- (Radola, 1980b; Goerth, Radola, 1980). В качестве верхнего
предела приводилось даже значение 20 000 (Baumann, Chrambach, 1975).
Отмечалось, что такое высокое значение Мг характерно для весьма
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed