Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 146

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 171 >> Следующая

10. 1 и 5 - НЬ из крови нормального взрослого донора, 2 - НЬ из крови
пупочного канатика, 3 - НЬ из крови пациента, гетерозиготного по HbD
Punjab, 4 - Hb из крови пациента, гетерозиготного по Hb Malmo. (Jeppson,
Berglund, 1972.)
ления генетических вариантов гемоглобина было предложено использовать ИЭФ
в плоских горизонтальных гелях, которое сегодня является наиболее
распространенным в этой области методом. На рис. 5.11,5 показан пример
использования этого метода для обнаружения нового мутантного гемоглобина
Malmo. С помощью ИЭФ был обнаружен и охарактеризован целый ряд
неизвестных ранее генетических вариантов, в том числе Hb Cochin-Port-
Royal (Wajcman et al., 1975), Hb Wood (Taketa et al., 1975); Hb Bicetre
(Wajcman et al., 1976); Hb Pontoise (Thillet et al., 1977); Hb Rothschild
(Gacon et al., 1977a) и Hb Djelfa (Gacon et al., 1977a). Особенно активно
использовался метод ИЭФ в плоских гелях для скриннинга гемоглобидов в
исследовательской группе Роза (Кретей) (Monte et al., 1976; Basset et
al., 1978). Авторы составили карту, включающую более 80 различных
гемоглобинов человека, которым отвечают примерно 50 дискретных полос при
ИЭФ в геле (рис. 5.12). Как видно из этой карты, большинство гемоглобинов
фокусируется в пределах отрезка протяженностью менее 1 ед. pH - от р1~6,6
до р1~7,5. На карте можно выделить три группы вариантов - группы "С-
подобных", "S-подобных" и "A-подобных" гемогло-
Расстояние от НЬА, мм
350
Глава 5
30
25
20
15
10
Е- +
н-
•S'- и
s -
S • -н --
Зона старения
- PI 6,98
10
15
"в, *=
'в,г:
р! 7,20
Метгемоглобин
- *• Portland
J Cairo
J Pans* J Buda*
J Cap* Town*
Chesapeake*
Malmo Fannri Lubbock
-,N Baltimore I Texas* Hopkins -II*
J ^ntoise*
J Baltimore J Broussais / J Oxford*
Hofu V/Grady ¦'/J Calabria //Wood \//К Woolwich si'''Camden / Camperdown
' ^
V/ Strasbourg Suresnes K- Hop* Cr*t*il J^San Diego - Ту Card
Hammersmith Bngham "Milwaukee , (Soln \ Saki
M Saskatoon ^Piti* Salpetrier*
B*th*sda
Bougardtrey Mali Hotel Oieu
G Georgia *
-/ M Boston*
G San Jose .
Osu Chnstiansborg Daneskgah Tehran Henri Mon dor Russ*
Mobil*
-^GCoushatta P Galveston St louis G Pest
D Outed Rabah Baylor I- D Punjab
G Philadelphia'
W innlpeg* Leporfr
Korl* Bu
X Travis v Montgomery*
v; G Galveston g Norto8i* Stanleyville H'-V inketer* ,
v Fort -d* France Sealy Arya Castilla G Ferrara Hamadan '"4 0 Iran Zurich
- - Siriraj
^ О Indonesia*
*- ? С Harlem О Arab Koln !
С S* Etienne
*- С Ziguinchor *- Constant Spring *
Рис. 5.12. Карта ИЭФ 79 вариантов гемоглобина человека, характеризующихся
примерно 50 различными значениями pi. Звездочкой помечены мутации в a-
цепи. IBi и 1Вц - валентные (Fe2+-Fe3+) гибриды НЬА. (Basset et al."
1978.)
Некоторые применения метода ИЭФ
351
(c)
НЬА*
/
а
Рис. 5.13 Фракционирование смеси четырех вариантов гемоглобина А, несущих
однотипные аминокислотные замены: а - ИЭФ в градиенте pH 6-9; б -
электрофорез на ацетилцеллюлозной пленке в щелочной среде. (Basset et al"
1982.)
бинов. Область "С-подобных" вариантов заселена наименее плотно, в ее
рамках почти все соответствующие мутанты удается получить в виде
неперекрывающихся индивидуальных зон. "S-область", напротив, заселена
очень плотно; в нее входят более 30 различных мутантов с очень близкими
значениями pi. Поэтому гомозиготное S/S-состояние, лежащее в основе
серповидно-клеточной анемии и проявляющееся в образовании наиболее
распространенного на Земле мутантного HbS, при ИЭФ легко спутать с менее
опасными генотипическими состояниями (например, с двойной
гетерозиготностью по HbS/D, или HbS/P, или HbS/G). В этих случаях ИЭФ
следует сочетать с другими, дополнительными тестами. "A-область" карты
тоже заселена очень плотно; в нее входят, в частности, несколько важных
патологических вариантов, в их числе Hb Koln и Hb St. Etienne (которые
склонны к потере гема), а также гемоглобины типа М, вызывающие врожденный
цианоз, поскольку они очень легко окисляются в мет-форму. Там же
фокусируются некоторые гемоглобиновые варианты, обладающие повышенным
сродством к кислороду (например, гемоглобины Bethesda, Brigham, Olympia)
и часто сопутствующие эритроцитозу или хроническому гемолизу. Таким
образом, и при определении гемоглобинов из "A-области" помимо ИЭФ следует
провести другие, независимые
352
Глава 5
исследования. Несмотря на это, можно отметить, что с помощью ИЭФ удается
достичь значительно более тонкого разделения мутантных гемоглобинов, чем
при обычном электрофорезе на ацетилцеллюлозных мембранах в щелочной среде
или при фракционировании в цитрат-агаре.
Для того чтобы оценить разницу между экспериментальными возможностями
методов ИЭФ в плоском геле и традиционного электрофореза, достаточно
взглянуть на рис. 5.13. Гемоглобин А смешивали с четырьмя мутантными
вариантами НЬА, несущими однотипные замены (Gly->-Asp); для сравнения
смесь подвергали ИЭФ и электрофорезу на ацетилцеллюлозе. Видно, что при
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed