Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 144

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 171 >> Следующая

образованного преципитатом гидроксида железа (III). Белковая часть,
имеющая форму полой сферы, характеризуется значением Л1г = 450 000. Ее
наружный диаметр равен 12 нм, а диаметр центральной полости - 7 нм (Hoare
et al., 1975). Железосодержащее ядро полностью изоли-
(c)
в
Некоторые применения метода ИЭФ
343
ровано от окружающего пространства и поэтому никак не сказывается на
электрофоретических и иммунологических свойствах ферритина (Harrison et
al., 1974). Белок состоит из 24 субъединиц, которые раньше считали
идентичными по массе (Мг 19 000) и структуре (Bryce, Crichton, 1971).
Недавно с помощью двумерного ИЭФ-электрофореза в ДДС-Na было показано,
что субъединицы неодинаковы по размеру и, вероятно, несколько различаются
по аминокислотному составу (Drysdale, 1977; Arosio et al., 1978b).
Рентгеноструктурный анализ показал, что внутренняя полость соединяется с
поверхностью шестью каналами. Каждый из этих каналов имеет максимальную
ширину 1,6 нм, а минимальную - 0,7 нм (Banyard et al., 1978). Ферритин
проявляет также каталитические свойства типа окси-доредуктазных - он
адсорбирует и окисляет ионы железа (Ste-fanini et al., 1976; Melinoetal.,
1978). Внутренняя полость ферритина может совсем не содержать железа, а
может включать его до 4000 атомов (Niitsu, Listowsky, 1973). Белок
проявляет заметную гетерогенность по размеру из-за склонности к агрегации
с образованием димеров, тримеров и более высокомолекулярных олигомеров,
которые удается легко разделить с помощью гель-фильтрации или
электрофореза (Suran, Tarver, 1975; Righetti et al., 1971).
Изоэлектрический анализ сыграл заметную роль в формировании современных
представлений о структуре и функциях тканевых ферритинов. Именно с
помощью ИЭФ для всех ферри-тинов была выявлена микрогетерогенность,
отражающая тот факт, что любой ферритин представляет собой семейство
близких изоформ с незначительно различающимися изоточками (Drysdale,
1974). Установлено, что число зон и их распределение при ИЭФ ферритинов
тканеспецифичны. Как видно из рис.
5.7, наиболее кислым и наименее гетерогенным является ферритин клеток
HeLa, наиболее основным - ферритин из печени. Такая микрогетерогенность
не связана со степенью насыщения железом и не является артефактом ИЭФ,
поскольку при повторном фокусировании индивидуальных зон не происходит
изменения их местоположения (Urushizaki et al., 1971; Ishita.ni et al.,
1975). В действительности гетерогенность определяется реальными
структурными различиями. Удалось показать, что все проанализированные
множественные формы ферритина состоят из двух видов субъединиц,
соотношение между которыми в целом белке зависит от типа ткани и связано
с общим содержанием ферритина в ткани данного типа (Arosio et al., 1978).
Была предложена модель, описывающая процесс образования изоферри-тинов с
различным относительным содержанием субъединиц двух видов: легких L-
субъединиц (Мг 19 000) и тяжелых Н-субъединиц (Мг 21-000). Как показано
на рис. 5.8, формы с ми-
344
Глава 5
> Печень Сердца HeLa
I'а Ж у щр;", -Ь '
Рис. 5.7. Профиль ИЭФ изоферритииов из печени, сердца и клеток HeLa.
Нижняя часть рисунка иллюстрирует относительное содержание субъединиц (Н
- тяжелых и L - легких) в изоферритииах из соответствующих тканей,
оцениваемое с помощью электрофореза в ДДС-Na (Drysdale, 1977b.)
нимальными значениями pi (р1~4,6; например, ферритин из клеток HeLa)
состоят в основном из Н-субъединиц, а с максимальными (р1~5,7; например,
чистый апоферритин или сывороточный ферритин) - в основном из L-
субъединиц (Drysdale, 1977b; Arosio., 1978). Н- и L- субъединицы,
вероятно, отличаются друг от друга и по иммунологическим свойствам,
поскольку антитела, полученные к ферритинам Н-типа, дают лишь очень
слабую перекрестную реакцию с формами, обогащенными L-субъединицами
(Arosio et al., 1976). Судя по всему, разные изоферритины характеризуются
различными физиологическими функциями. По данным Wagstaff et al., 1978,
кислые (богатые Н-субъединицами) ферритины быстрее связывают желе-
Некоторые применения метода ИЭФ
345
МгЛО~' pi
H24L0-550
Ф
21
О -1"
M0L24~460
Не La
Сердце
Л
Почки
Печень,
селезенка
Нативный 5,7 ^поферритин
Рис. 5.8. Субъединичное строение изоферритииов и типичное распределение
их по различным тканям. В состав белка в различных количественных
соотношениях входят субъединицы двух типов - Н (тяжелые) и L (легкие).
Для наглядности различия в размере альтернативных мультимерных структур
преувеличены. (Drysdale et al., 1977b.)
зо, чем более основные ферритины (богатые L-субъединицами) (см. рис.
5.9). Кроме того, обнаружено, что при повышенном содержании железа, как
правило, наблюдается повышение уровня ферритинов L-типа, в то же время
при опухолях или недостаточности железа преобладают ферритины Н-хипа
(Drysdale, 1979).
Сывороточному ферритину, открытому сравнительно недавно с помощью
радиоиммунологического метода (Addison et al., 1972), придают сегодня
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed