Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 132

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 126 127 128 129 130 131 < 132 > 133 134 135 136 137 138 .. 171 >> Следующая

постепенное снижение катодного дрейфа до нуля в точке эквивалентности.
При включении избыточного количества ДМАПМА изменяется направление
дрейфа, который, таким образом, становится уже "анодным дрейфом" (рис.
4.14).
316
Глава 4
Итак, ввиду того что в зависимости от суммарного заряда матрицы может
наблюдаться катодный дрейф, "нулевой" дрейф (сбалансированные матрицы)
или анодный дрейф, можно полагать, что главной причиной дестабилизации
градиента pH при ИЭФ в геле является электроэндосмос. В то же время
катодный дрейф может быть отчасти связан и со структурными особенностями
самих амфолитов-носителей (Bjellqvist, личное сообщение), катионная форма
которых характеризуется в среднем на 5% более высокой подвижностью, чем
анионная. Это проявляется в медленном смещении градиента pH к катоду. И
все же "сбалансированные гели", а также разработанные недавно системы с
иммобилизованными градиентами pH (Bjellqvist et al., 1982а,b), судя по
всему, позволяют окончательно избавиться от неприятностей, связанных с
явлением катодного дрейфа.
4.10. Неполадки и их устранение0
Проблема: плохая полимеризация, слишком большое время гелеобразования
(полиакриламидные гели).
Причины и меры по устранению.
а. Неправильный состав смеси (слишком низкие значения Г и С).
б. Недостаточное количество инициатора (персульфата, рибофлавина) или
катализатора (ТЕМЭД) полимеризации. Все же не следует повышать
концентрацию более чем в 1,5 раза для персульфата и более чем в 2 раза
для ТЕМЭД по сравнению с рекомендуемыми значениями (Righetti, Macelloni,
1982).
в. Некачественный инициатор; персульфат разлагается в растворе, поэтому
следует готовить свежий раствор не реже, чем раз в неделю, и хранить его
при 4 °С.
т. Неподходящий инициатор; в щелочной среде рибофлавин практически
неактивен.
д. Слишком низкая температура, однако при использовании персульфата
температура все же не должна превышать 45- 50 °С.
е. Неправильное освещение; при инициации рибофлавином следует
использовать источники ультрафиолетового, а не видимого света, т. е.
флуоресцентные трубки, а не лампы накаливания. Формы для полимеризации
геля не следует делать из материалов, сильно поглощающих в УФ-области.
Обычно в этом случае пользуются тонкими стеклами, а не толстыми
пластиковыми пластинами.
ж. Присутствие ингибиторов. Кислород из воздуха: готовый раствор следует
тщательно деаэрировать, уравновесить азотом
о Этот раздел написан д-ром Е. Gianazza.
Общие экспериментальные аспекты
31Г
и немедленно залить в форму. Спирты, меркаптаны, пыль: не-следует
вымачивать пластиковые и резиновые части формы для полимеризации в
мыльном растворе.
з. Контакт с воздухом при полимеризации: приводит к образованию неровной
верхней кромки. Следует использовать закрытую форму или после заполнения
формы сверху осторожно наслоить воду.
Проблема: слишком высокий ток, чрезмерно высокая температура геля.
Причины и меры по устранению.
Избыток соли в геле (неправильный состав, слишком большая концентрация
персульфата) или в образцах (в этом слу-; чае ток резко возрастает только
после внесения образцов). 06-¦ разцы следует диализовать против раствора
амфолитов (глицина, амфолитов-носителей соответствующего диапазона pH)
или-слабого буфера (предпочтительно (МН^СОз, трис-СНзСООН,. трис-глицина
и т. п.). Если электропроводность в начале была нормальной, но в ходе
эксперимента не уменьшается, то это может означать, что произошла ошибка
в полярности электродов. Следует проверить pH в электродных полосках.
Исправить ошибку (если она действительно произошла) невозможно. Если--в
ходе ИЭФ электропроводность неожиданно возрастает, это-означает, что
происходит короткое замыкание (см. ниже - "подгорание геля"). Следует
немедленно отключить ток и удалить избыток жидкости с поверхности геля.
Проблема: подгорание геля.
Причины и меры по устранению.
а. Испарение жидкости по всей поверхности геля означает,, что система
перегрета из-за превышения допустимой электрической мощности или
неэффективного охлаждения.
б. Подгорание геля по краям означает, что электродные полоски слишком
длинны (они должны быть на несколько миллиметров короче геля). Другая
возможная причина - затеки жидкости у краев геля. Укоротить полоски,
удалить воду, обрезать и удалить подгоревшие края.
в. Подгорание геля у катодной полоски: образование зоны чистой воды.
Может происходить при использовании неподходящего католита (подобрать
менее основный); можно также-расширить градиент pH в щелочную область,
добавив некоторое количество амфолитов-носителей диапазона pH 6-8 или 3-
10. При длительных опытах может происходить частичный гидролиз матрицы;
если нанесение образцов занимает много времени, то электродные полоски
лучше накладывать после нанесения образцов, непосредственно перед ИЭФ.
г. Подгорание в центральной части геля: слишком высокое содержание соли в
образце.
318
Глава 4
Проблема: "волны" на поверхности геля
Причины и меры по устранению.
Предыдущая << 1 .. 126 127 128 129 130 131 < 132 > 133 134 135 136 137 138 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed