Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 112

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 106 107 108 109 110 111 < 112 > 113 114 115 116 117 118 .. 171 >> Следующая

сфере их применения. Детальная информация по применению двумерных методов
фракционирования содержится, например, в материалах последних симпозиумов
(Righetti, 1975; Radola, Graesslin, 1977; Catsimpoolas, 1978; Radola,
1980; Allen, Arnaud, 1981). Начато систематическое картирование всех
продуктов генома человека (Anderson, Anderson, 1977, 1978а,b), которых,
по современным оценкам, насчитывается от 30 до 50 тысяч. Эти исследования
включают картирование белков из эритроцитов (Edwards et al., 1980), слюны
(Giometti, Anderson, 1980)-, мочи (Tollaksen, Anderson, 1980), лимфоцитов
периферической крови (Willard, Anderson, 1980; Anderson, 1981). В
литературе описано применение двумерного фракционирования в клинической
биохимии (Thorsrud et al., 1980), а также для анализа липопротеинов
человека (Zamnis, Breslow, 1980), клеток, пораженных вирусом (Drzenieck
et al.,
1980), фибробластов человека (Singh et al., 1978; Burghess et al., 1981),
белков цитозоля клеток печени (Elliott et al., 1978), ядерных белков
(Hurley et al., 1978), основных внутриклеточных белков (Sanders et al.,
1980; Willard et al., 1979), белков из мембран эритроцитов (Harell,
Morrison, 1979), митохондриальных рибосомных (Czempiel, 1979) и
микросомных белков (Кпй-fermamn, 1977), мембранных белков из корня волоса
(Singh et al., 1981), белков слюны при кистозном фиброзе (Bustos, Fung,
1981) и белков амниотической жидкости человека ^(Burdett et al.,
1981). К сожалению, к тому времени, когда этот список дойдет до читателя,
он уже в значительной степени устареет.
3.5. Предстационарное ИЭФ (TRANSIEF)
В работах Catsimpoolas, 1973с-f, был предложен ряд остроумных
экспериментальных приемов, позволяющих проводить контроль аналитического
ИЭФ в режиме непрерывного сканирования. Это позволяет непосредственно
наблюдать за ходом!
268
Глава 3
фракционирования, в том числе и на самых первых его этапах. Метод дает
количественную информацию о параметрах, характеризующих процесс ИЭФ, и
помогает изучить некоторые физико-химические свойства амфотерных молекул.
Система контроля объединяет сканирующее устройство с блоками
непосредственной цифровой регистрации и обработки данных. Она позволяет
непрерывно контролировать и регистрировать положение пиков и их площадь,
следить за изменением градиента pH, определять значения pi. В отличие от
традиционного ИЭФ, дающего информацию только о стационарном состоянии
системы, метод предстационарного ИЭФ (TRANSIEF) позволяет следить за
кинетикой разделения. Рассматриваются главным образом три разных этапа:
начальное фокусирование, дефокусирование и рефокусирование. Первый этап
включает процессы электрофоретической миграции амфотерных молекул в
область своих значений pi с постепенным формированием стационарного
состояния ИЭФ. На втором этапе рассматриваются процессы диффузии
сфокусированных компонентов при снятии электрического поля, а на третьем
- процессы "реставрации" стационарного состояния после повторного
приложения поля.
Метод предстационарного ИЭФ позволяет получить важную информацию о
минимальном времени, необходимом для фокусирования индивидуальной
белковой зоны. Он также дает возможность количественно охарактеризовать
процессы искажения или дестабилизации градиента pH, проявляющиеся,
например, в виде так называемого "эффекта плато" или "катодного дрейфа"
(см. разд. 4.9). В полном соответствии с прежними данными (Righetti,
Drysdale, 1971) в работе Catsimpoolas, 1973с, было установлено, что
эффект плато, как правило, проявляется в постепенном усилении миграции
наиболее основных амфолитов к катоду при практически неизменном положении
зон, примыкающих к аноду. Исследуя процесс дефокусирования, автор оценил
коэффициенты диффузии различных белков. Для этого он измерял скорость
уширения зоны в отсутствие электрического поля и определял зависимость
дисперсии о для диффундирующей зоны от времени и от концентрации геля. Из
наклона соответствующих прямых были оценены коэффициенты диффузии D для
различных белков. Впрочем, полученные таким образом значения D оказались
значительно выше соответствующих значений, определяемых по данным
ультрацентрифугирования. Возможно, это обусловлено взаимодействием белков
с матрицей геля. С помощью настоящего метода можно также получить
сведения о размере белковых молекул и их массе. Для этого определяют
коэффициенты торможения белков при различных значениях пористости геля.
В работе Catsimpoolas, Griffith, 1973, была опубликована
Аналитическое ИЭФ
269
Рис. 3.36. Диаграмма, отражающая зависимость между pH, подвижностью,
расстоянием миграции и концентрацией белка при ИЭФ. Характер движения
белка по направлению к своей изоточке определяется зависимостью
подвижности от pH (cLVf/dpH - плоскость а) и формой градиента pH (dpH/dx
- плоскость с). Таким образом, наблюдаемая зависимость подвижности белка
от координаты (dM/dx - плоскость Ь) определяется одновременно обоими
упомянутыми выше параметрами. Обозначения', х - расстояние миграции
Предыдущая << 1 .. 106 107 108 109 110 111 < 112 > 113 114 115 116 117 118 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed