Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 103

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 171 >> Следующая

Haglund, 1971
Dubernet, Riberau; Gay-on, 1974 Leaback, Rutter, 1968
Ihorstensson et al., 1975
Dale, Latner, 1968; Cha-moles, Karcher, 1970a, b; Righetti, Drysdale,
1973
Castimpoolas, 1969b Groome, Belyavin, 1975
Hayes, Wellner, 1969 Kuhln et al., 1979b.
Delincee, Radola, 1970, 1971; Rucker, Radola, 1971
-----------
продолжение
Аналитическое ИЭФ
245
Фермент
Субстрат и хромофор
Литературный источник
Ирокарбоксипептидаза А
Супероксиддисмутаза А (индофенолоксидаза) Ингибитор трипсина и а-
химотрипсина
¦Фосфоглкжомутаза
6-фосфог л юкон ат дегидрогеназа "-L-фукозидаза
Щелочная фосфатаза
Щелочная фосфотаза
Зстераза
Эстеразы
н-Карбо-р-нафтокси-L--Phe/Диазониевый Голубой В7>/Трипсии МТТ/ФМС1), на
свету
М-ацетил-D, L-Phe-p-наф-тиловый эфир/Трип-син/а-химотрипсин Глюкозо-1 -
фосфат/Г лю-козо-6-фосфатдегидро-геназа/1ЧА1)Р/ФМС/ /МП" 6-фосфоглюконат/
/NADP/ФМС/МТТ1) 4-метилумбеллиферил a-L -фукозид а-Нафтилфосфат/4-ами-
нодифениламиндиазо-ний сульфат р-Нафтилфосфат/Быст-рый голубой ВВ
(соль)8) или 4-метил-умбеллиферилфосфат а-Нафтилацетат/Быст-рый красный
TR (соль)9)
Нафтил адетат/Б ыстр ый гранатовый GBC, диа-зониевая соль2)
Kim, White, 1971
Carter et al., 1976; Наг" ris et al., 1974 Kaiser et al., 1974
Bark et, al., 1976; Brink-mann et al., 1972
Omoto, Miyake, 1978 Righetti, Drysdale, 1971
Smith et al., 1971 Bianchi, Stefanelli, 1970
Young, Bittar, 1973; Narayanan, Ray, 1977
*) ФМС - феназинметосульфат; MTT - 3-(4,5)-диметилтиазолин-2,5-
дифенилтетразолвЙ-бромид.
*) Fast Garnet GBC salt - о-аминоазотолуол, диазониевая соль.
*) ДХИФ - 2,6-днхлориндофенол.
4) Fast Black К salt - 4-амино-2,5-диметокси-4'-нитроазобензол,
диазониевая соль.
•) Nitroblue tetrazolium - 2,2'-ди-я-нитрофенил-5,5?-днфенил-3,3'(3,3'-
диметокси-4,4'-дифени-лен) дитетразолийхлорид.
*) Метод реплики на фильтровальной бумаге (Whatman № I), им прет ни рова
иной субстратом в буферном растворе.
7) Diazo Blue В - тетразотированный о-дианизидин.
*) Fast Blue ВВ salt - диазотнрованный 4'-амино-2',5'-
диэтоксибензанилид*2пС1а.
*) Fast Red TR salt - толуидиндиазоний*гпС12.
зования метода зимограмм для обнаружения различных сфокусированных
ферментов с применением низко- и высокомолекулярных субстратов. В табл.
3.11 приведены некоторые общепринятые методики определения ферментов с
использованием наложения субстратсодержащих слоев (Wadstr5m, Smyth,
1975а). Вместо наложения агарового слоя можно использовать метод
¦бумажных реплик (Radola, 1973а) или метод отпечатков на
Таблица ЗЛО. Применение Метода зимограмм с использованием
высокомолекулярных субстратов в сочетании с ИЭФ (в плоских гелях)
(Wadstrom, Smyth, 1975а)
Фермент
Субстрат
Метод регистрации
Литературный
источник
Стафилокиназа1*
Целлюлаза
а-Амилаза
Пепсин
Субтилопептида-за, трипсин, <5-химотрипсин, неочищенные бактериальные
про-теазы
Сгусток фибрина, содержащий плазминоген Карбоксиметил-целлюлоза
Крахмал/иод
Альбумин/кум ас-си синий Казеин (не содержащий витаминов)
Использование Vesterberg, Eriks-субстрата в ви- son, 1972 де геля
Снятие бумажной Eriksson, Petersson, реплики 1973
Получение отпе- Beeley et al., 1972 чатка на крахмальной пленке Иммерсия
Vesterberg, 1973b
Наложение агаро- Arvidson, Wad-вого геля с суб- strom, 1973 стратом
>) Активатор плазминогена из Staphylococcus aureus.
Таблица 3.11. Определение ферментов с помощью наложения агарозных гелей,
содержащих соответствующие субстраты и буферные компоненты (Wadstrom,
Smyth, 1975а)
а-Амилаза
Дезоксирибону-
клеаза
Пеннциллиназа
Фосфолипаза С
Протеаза
Стафилококковый
гемолизин
Эластаза
Амилазный тест ("Phadebas", Pharmacia) 1 таблетка/10 мл ДНК из спермы
лосося (Koch-Light) или тимуса теленка (Koch-Light), 1%-ный раствор 0,2%-
ный растворимый крахмал (Merck), бензилпенициллин (АВ Kabi), 20 мМ
раствор Люголя: Н20-1 : 1 Лецитин из сои (Sigma), 1,5%-ная эмульсия
Девитаминизированный казеин (NBC), 1%-ный раствор, pH 7,4 Эритроциты
человека, кролика или барана (3%)
Эластин (Worthington) 0,5%
0,05 М трис-НС1, pH 7,4 12,5мМСаС12 и
12,5 мМ MgCl*
0,1МКН2РО4, pH 5,9
0,15 М NaCl в 0,02 М трис-НС1, pH 7,4
1 мМ СаС12 и 1 мМ ZnCl2
2 мМ КН2Р04 и 1 мМ СаС12
0,15 М NaCl в 0,02 М трис-НС1, pH 7,4
0,01 Мтрис-НС1, pH 8,8
J) Приведена конечная концентрация субстратов, буферных компонентов н
солей В (1,0-1,5)%-ном агарозном геле.
Аналитическое ИЭФ
247
Рис. 3.25. Частота полиморфизма сывороточных белков, выявленная с помощью
обычного электрофореза (слева) и изоэлектрофокусирования (справа). ФГМ -
фосфоглюкомутаза; Р[--антитрипсин; Тф - трансферрин; <дст-Gc-глобулин
(группоспецифический компонент); Фук-а-фукозидаза; Апо Е - аполипопротеин
Е; С2 и Се - соответствующие компоненты системы комплемента. (Kuhnl,
1977.)
пленках типа Celloclear (Chemetron, Milano). Последние представляют собой
прозрачные ацетилцеллюлозные мембраны (выпускаются в виде листов
различного размера и толщины) с очень широкими порами, благодаря чему
происходит быстрое установление равновесия при диффузии как низко-, так и
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed