Практикум по сельскохозяйственной фитопатологии - Попкова К.В.
ISBN 5-10-000407-Х
Скачать (прямая ссылка):
Число спор в 15 каплях, взятых для разбавления осадка после центрифугирования,— 586,5X 15 = = 8797,5.
Нагрузка спор на одно зерно в данном примере составит: 8797,5: 100 = 87,975 (88 спор).
Для определения нагрузки спор па одно зерно можно пользоваться формулой
V А-к
где А — среднее число спор в одном поле зрения; К — коэффициент (число полей зрения покровного стекла, умноженное на число капель воды, добавленных к осадку после центрифугирования); 100 — число зерновок в пробе.
Биологический метод. Используют для выявления внутренней нифскции семян. Оп основан на стимулировании развития микроорганизмов, позволяет установить вид возбудителя и степень поражения. В зависимости от целей и задач фитопатологического анализа семян формы этого метода могут быть различными.
Метод влажных камер. В качестве влажной камеры используют чашки Петри или Коха, па дно которых кладут фильтровальную бумагу либо марлю в
2—3 слоя. Перед раскладкой семян чашки стерилизуют и завертывают в бумагу.
Подстилку увлажняют кипяченой или стерилизованной водой комнатной температуры. Семена раскладыва-
ют в боксе стерильным пинцетом и при соблюдении других условий стерильности в работе.
Для выявления более глубокой инфекции семена перед посевом дезинфицируют 95—96%-ным спиртом, опуская в него семена иа 1 мин, затем просушивая листами фильтровальной бумаги, или 0,5%-ным КМ11О4 в течение 5 мин, после чего промывают холодной водой. Хорошим дезинфицирующим средством против бактерий является раствор сулемы (1 :1000), в который семена погружают на 1,5—3 мин. После этого необходима тщательная промывка семян водой.
Протравленные семема не дезинфицируют. Чашки Петри с разложенными семенами помещают в термостат, где поддерживают температуру 18—20°С в течение 7 дней (период инкубации).
Температурный режим и период инкубации устанавливают с учетом культуры и возбудителя. Например, для выявления зараженности семян грибом Fusarium nivale инкубация продолжается 14 дней при 8—10°С, а Drechslera sorokiniana — 8 дней при температуре 20°С с чередованием освещения и затемнения.
Высев семян па твердые питательные среды. Этот способ позволяет наиболее точно выявить внутреннюю зараженность семян.
Питательные среды могут быть различными. Приведем наиболее часто употребляемые из них.
Картофельный агар (КА). Для его приготовления 200 г вымытого и очищенного картофеля нарезают ломтиками, заливают 1 л воды и кипятят 40 мин. После этого раствор фильтруют, к фильтрату добавляют до 1 л воды, вносят 20 г агар-агара и на кончике скальпеля лимонную кислоту. Всю эту смесь кипятят до полного растворения агара. Полученную жидкость разливают в чашки Петри или в пробирки по 10 см:* и стерилизуют под давлением 101 кПа (1 атм) в течение 30 мин.
Кислый картофельный агар (ККА) готовят так же, как и картофельный агар, но после стерилизации агара в чашках Петри или в пробирках в каждую пробирку добавляют непосредственно в автоклаве по 1—2 капли 50%-ного раствора лимонной кислоты. Эту среду используют для определения видов Fusarium по методике А. И. Райлло (1950).
Сусловый агар готовят из пивного неохмеленного сусла, которое разбавляют водой до 7° по ареометру
Баллипга и вносят 1,5—2% агар-агара. Смесь разогревают, разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при 50,5—101 кПа (0,5—1 атм) в течение 30 мин.
Для подкисления среды вносят соляную кислоту (pH среды доводят до 4,5—4,8). Сусловый подкисленный агар часто используют для определения видов Fusariutn по В. И. Билай.
Среду Чапека широко используют для выращивания многих грибов и особенно почвенных патогенов и разрушителен древесины. Ее состав следующий, г на 1 л воды:
сахар (мальтоза, глюко 30
за и др.)
NaN03 2,0
КН2Р04 1,0
MgS04 0,5
КС1 0,5
FeSO* 0,01
агар-агар 25
Питательные среды для бактерий должны иметь немного щелочную или нейтральную реакцию. Наиболее часто употребляют мясонептоииый агар (МПА), который готовят из мясопептонного бульона и агара.
Агаровые питательные среды в колбочках или в пробирках можно хранить не более 1 месяца. Перед раскладкой на питательные среды семена обязательно дезинфицируют. Чашки Петри устанавливают в термостате.
Развивающиеся микроорганизмы из зараженных семян переходят па питательную среду и образуют характерные для каждого вида колонии. По характеру колонии и форме спороношения определяют вид патогена.
Посев семян во влажный кварцевый песок. Применяют для обнаружения болезней, которые проявляются на проростках и всходах. При этом выявляют различные типы поражения возбудителями грибных и бактериальных болезней (пятпа и язвы на стебельках, семядольных и настоящих листьях).
Грунтовой контроль позволяет выявлять зараженность семян в полевых условиях. Метод применяют для обнаружения таких болезней, которые прпуроче-иы к более поздним этапам развития растений, например для обнаружения пыльной головни шпеипцы и ячменя, проявляющихся в период колошения.
