Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.
Скачать (прямая ссылка):
его смеси с альбумином. Подавляющий эффект 5-фторурацила, введенного в виде альбуминовых МЧ, на развитие асцитной опухоли Эрлиха был значительно выше, чем для свободного ФАВ. При многократном введении МЧ выживаемость животных была на 50 % выше, чем в контрольной группе. Особенно значительное подавление наблюдалось при внутриопухолевом введении. В этом случае концентрация ФАВ в опухоли была намного выше, чем при таком же введении свободного ФАВ.
5-Фторурацил, ковалентно связанный с альбуминовыми МЧ, был получен по следующей схеме [20]:
Alb—NH2-M4 из альбумина
5-Фторурацил, заключенный в МЧ, в опытах на мышах показал активность в отношении различных опухолей. Причина проявления противоопухолевой активности, по-видимому, заключается в лизосомотропных свойствах МЧ.
Другое противоопухолевое ФАВ, митомицин С, было ковалентно присоединено к МЧ агарозы бромциановым методом [21]. Полученные системы оказались столь же активны, как и исходное ФАВ, но действовали дольше и были существенно менее токсичны для мышей. Механизм действия в данном случае, по-видимому, включал гидролиз изоуреидной связи и постепенное высвобождение низкомолекулярного ФАВ. Таким образом, прочность связи ФАВ с МЧ оказывает решающее влияние на механизм его действия: если эта связь не расщепляется до попадания МЧ в клетку, то наблюдается лизосомотропия и выделение ФАВ в клетке; если расщепление происходит раньше, то имеет место постепенное высвобождение ФАВ в кровоток. Для избирательной подачи митомицина С достаточно включения ФАВ в желатиновые МЧ разного размера [22]. Микросферы со средним диаметром 0,28 мкм локализовались преимущественно в печени и селезенке, микросферы со средним диаметром 14,9 мкм локализовались за счет механической фильтрации в легких. При этом высвобождение ФАВ из мелких сфер происходило быстрее, чем из крупных (50 % выделяется соответственно за 0,5 и 2 ч).
Крупные (40—160 мкм) микросферы из ДЭАЭ-целлюлозы, способные электровалентно связывать анионные ФАВ, селективно и быстро накапливались в легких, постепенно выделяя
содержащееся в них ФАВ, однако они оказались не способны к биодеструкции [23].
Белковые МЧ, способные к биодеструкции, получают не только термической полимеризацией, но и сшиванием белка. Так, альбуминовые микросферы диаметром 10—25 мкм для внутриартериальной подачи ФАВ (5-фторурацил и блеомицин) в опухоль получены сшиванием эмульгированной смеси альбумина и ФАВ глутаровым диальдегидом [24]. Количество сшивающего агента определяло скорость высвобождения ФАВ in vitro.
Альдольной поликонденсацией глутарового диальдегида синтезирован нерастворимый в воде полимер с М = 12—20 тыс. и различным содержанием альдегидных групп [25]. На основе этого полимера получены микросферы со средним диаметром 0,45 мкм, к которым присоединен противоопухолевый амино-гликозидный антибиотик адриамицин. Адриамицин не выделялся из микросфер при контакте с буферным раствором или плазмой крови. Авторы предполагают, что микросферы с химически связанным адриамицином окажутся пригодными для терапии устойчивых форм злокачественных новообразований (лейкоза), возникающих при нарушении связывания антибиотика с клеточной поверхностью, так как изменение механизма доставки ФАВ в орган-мишень может привести к преодолению лекарственной устойчивости.
МЧ из сшитого полиакриламида с включенным в них белком описаны в работе [26]. Количество белка зависит от концентрации акриламида и сшивающего агента, а также от природы белка (сывороточный альбумин, р-лактоглобулин, иммуноглобулин G) и достигает 35% или 1,05 мкмоль на 1 г массы сухого вещества. Включенные белки (альбумин) сохраняют способность обратимо взаимодействовать с низкомолекулярными соединениями вследствие макропористой структуры носителя. Плотность МЧ, содержащих белок (1,05—1,07 г/см3), достаточно близка к плотности форменных элементов крови, что важно для обеспечения устойчивости их суспензии. Механическая стабильность и устойчивость к бактериальной деградации также вполне достаточны. Карбоангидраза, иммобилизованная в сильно сшитых полиакриламидных микрочастицах [27], ведет себя подобно ферменту в растворе при значительном повышении стабильности к термоинактивации и протеолизу, так как протеазы могут реагировать только с белком, находящимся на поверхности частиц. По всем этим параметрам МЧ с карбоан-гидразой превосходят микрокапсулы с тем же ферментом.
Изучение судьбы меченных ИС микросфер из сильно сшитого полиакриламида размером 0,25—0,30 мкм в организме животных показало, что они быстро исчезают из циркуляции (для крыс период полуисчезновения составляет «40 мин) в результате по-лощения макрофагами главным образом печени и селезенки
(«80%) [28]. Через 1 ч после внутривенного введения микросферы появились в костном мозгу, а затем агрегаты микросфер обнаружились и в легких. Примерно через 16 недель радиоактивность резко снизилась в печени и селезенке, а в стенках кишечника сохранялась до 2 мес. Хотя авторы полагают, что акриловые микросферы медленно биодеструктируют, наблюдаемые явления могут быть объяснены также и выделением микросфер или их фрагментов с желчью. Никаких токсических эффектов при дозе 9,8 мг микросфер на одну мышь отмечено не было в течение 45 недель. Включенная в такие микросферы L-аспарагиназа имеет те же кинетические характеристики, что и фермент в растворе [29], но более стабильна. Внутривенное введение микросфер с ферментом крысам (200 и. е./кг) приводит к резкому снижению уровня аспарагина в плазме, который нормализуется через 4—5 сут (так же, как в случае введения нативного фермента). Внутрибрюшинное введение 1000 и. е./кг аспарагиназы в микросферах позволяет снизить содержание аспарагина на 14 сут, а аспарагиназная активность в лимфе поддерживается и после этого. Включение аспарагиназы в МЧ не препятствует образованию к ней антител, причем при внутрибрюшинном и внутривенном введении оно более значительно, чем для растворимого фермента, а при внутримышечном введении — слабее. Поэтому последний путь введения МЧ в данном случае предпочтителен [30].
