Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.
Скачать (прямая ссылка):
[—СН2СН—1-----[— СН2СН—1
I I
О О (6'з,,
N+ Х“ № Х“
С2Н5 CieH33
Полученный конъюгат вводили нормальным мышам и наблюдали очень сильный иммунный ответ. Количество АОК, специфичных по отношению к БСА, примерно на 1—2 порядка превышало то, что образуется при иммунизации животных чистым БСА или при раздельных инъекциях БСА и полимерного носителя. Аналогичный результат был получен при использовании другого полимер-белкового конъюгата (5.36). Степень полимеризации полиэлектролитного носителя здесь также составляла 103, однако в этом случае глобула БСА была прикреплена к носителю ковалентной связью (в среднем одна глобула на одну цепь).
[—СН2СН—]-------[—СН2СН—]---[— СН2СН—] „ ,
| ~60 | «<40 |
ООО ,5Ж)
N N+ N+
I I
СН2СОО" CH2CONH—БСА
На рис. 5.6 приведены данные по кинетике накопления АОК против БСА в ответ на введение полимер-белковых конъюгатов в сравнении с данными контрольных опытов. Видно, что при комбинировании слабого белкового антигена с полимерными
Рис. 5.6. Кинетика накопления антителообразующих клеток в селезенке мышей против БСА-детерминант искусственных антигенов, полученных присоединением БСА к сополимерам на основе ПВПД:
/— введение ковалентного конъюгата БСА — сополимер; 2—введение устойчивого при физиологических значениях ионной cnjy?i комплекса БСА—сополимер, стабилизированного цетнльнымн остатками; 3—введение электростатического комплекса ВСА—ПВПД—R?, относительно неустойчивого при физиологических значениях ионной силы; 4—вве денне чистого БСА (дозы в расчете на БСА во всех случаях одинаковы)
адъювантами действительно получаются очень сильные искусственные антигены, вызывающие синтез антител, специфичных по отношению к белковой составляющей конъюгата. Замечательно, что и эти антигены оказываются тимус-неза-о 5 ю 15суш висимыми [178]. Последнее обстоя-
тельство было строго установлено в опытах на мышах особой генетической линии Nude. Мыши этой линии от природы не имеют тимуса и, следовательно, полностью лишены Т-аппарата иммунной системы. Введение им чистого БСА (очень слабый антиген) вызывает очень слабый иммунный ответ у нормальных мышей и практически не вызывает иммунного ответа у бестимусных мышей. При введении искусственного антигена, содержащего БСА, как уже отмечалось, резко усиливается иммунный ответ у нормальных мышей. Но и у бестимусных мышей он также достигает высокого уровня.
Наконец, описанный выше поликатионный носитель, содержащий цетильные группы, соединяли с сильным тимус-зависи-мым природным антигеном — бычьим гамма-глобулином (БГГ). В данном случае на каждый линейный поликатион приходилось в среднем по одной глобуле БГГ. При иммунизации таким конъюгатом нормальных мышей сила иммунного ответа значительно возрастала по сравнению с контролем. Введение БГГ мышам, лишенным Т-аппарата, естественно, практически не приводит к выработке антител. Однако конъюгат вызывает сильный иммунный ответ против БГГ и у этих мышей.
Таким образом, соединение как слабых, так и сильных ти-мус-зависимых модельных белковых антигенов с полимерными стимуляторами позволяет получить сильные тимус-независимые искусственные иммуногены, индуцирующие выработку антител против соответствующих белков.
Развитые выше представления о мембраноактивных поли-электролитных стимуляторах иммуногенеза могут быть использованы для целенаправленного конструирования искусственных иммуногенов.
Одна из перспектив использования предложенного класса искусственных иммуногенов связана с упомянутым в начале раздела открытием Ir-генов, управляющих силой иммунного ответа на конкретные антигены. Установлено, что Ir-гены проявляют свои функции в тесной связи с функциями Т-лимфоцитов, а также в процессах миграции и кооперации Т- и В-клеток. В свете этих фактов и результатов суммированных выше исследований общая задача — получение искусственных антигенов, которые позволили бы обойти Ir-гениый контроль силы иммунного ответа [179].
Были синтезированы искусственные антигены, представляющие собой комплексы хорошо известного синтетического полипептида (Т, Г)-А-Л-сополимера тирозина, глутаминовой кислоты, аланина и лизина, с полиэлектролитами. Сам по себе это|т антиген вызывает иммунный ответ узкой специфичности, контролируемый Ir-lA-геном. Полученные ковалентные конъюгаты (Т,Г)-А-Л с ПАК и С-АК-ВП содержали 90—100 мкг полипептида на 1 мг конъюгата [180]. Для индуцирования первичного антительного ответа на (Т,Г)-А-Л мышей линии СВА и C57BL/6 иммунизировали чистым (Т,Г)-А-Л или конъюгатами (Т,Г)-А -Л с ПАК или С-АК-ВП, или модифицированным сополимером акриловой кислоты и винилпирролидона (м-С-АК-ВП) в дозе 1 мг. Для оценки вторичного иммунного ответа иммунизированным животным через 1 мес. внутрибрюшинно вводили раствор чистого (Т,Г)-А-Л в дозе 40 мкг.
