Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.
Скачать (прямая ссылка):
цитоза с последующим проникновением через мембрану фаго-сомы внутрь цитоплазмы. Возможно, что цепь В также участвует в преодолении мембраны фагосомы. В цитоплазме цепь А ингибирует синтез белка, чем объясняется токсическое действие. Было показано, что цепь В может быть замещена другими связывающими с поверхностью клетки молекулами (гормонами, фактором роста, антителами) с сохранением цитотоксичности, свойственной цепи А рицина, но со строго определенной клеточной специфичностью [150]. Образующиеся иммунотоксины несколько менее токсичны, чем рицин. Конъюгаты антител и цепи А ие токсичны для неэндоцитирующих клеток, а также для клеток, к которым данные антитела не специфичны. Роль токсического агента может играть не только цепь А, но и другие белки: неокарциностатин [151] и противовирусный белок из Phytolacca Americana [152].
Изучение иммунотоксинов in vitro позволило сделать ряд выводов [149] :
если антитела связаны с полным токсином (например, рицином), то такой подход пригоден только для исследований in vitro, поэтому в иммунотоксинах используют A-цепи, в которых специфичность связывания, свойственная лектинам, отсутствует;
иммунотоксины, содержащие вместо полного иммуноглобулина его связывающий фрагмент F(ab)', по-видимому, менее токсичны, чем содержащие фрагмент F(ab)2;
иммунотоксины, полученные с некоторыми моноклональными антителами, оказались мало цитотоксичны либо из-за низкого сродства к антигенам, либо из-за неспособности эффективно вызывать эндоцитоз.
Для получения иммунотоксинов сначала выделяют А-цепи рицина восстановлением дисульфидных связей. Для сшивания A-цепей с антителами используют многие реагенты [153]. Наиболее удачным среди них оказался гетеробифункциональный N-гидроксисукцинимидный эфир 3- (2-пиридилтио) пропионовой кислоты, описанный выше. Им ацилируют аминогруппы антител и модифицированные таким образом антитела вводят в тиол-дисульфидный обмен с цепями А. Образующийся конъюгат отделяют от исходных веществ и определяют их связывающую способность радиоиммунным методом, а токсичность — на культуре целевых клеток. Последняя бывает столь велика, что одна молекула конъюгата, попавшая в цитоплазму, приводит к гибели клетки.
Как отмечалось, основное назначение иммунотоксинов заключается в уничтожении определенного типа клеток (не обязательно делящихся), которые не имеют локализации в организме. Это открывает перспективы при лечении различных форм лейкоза, в частности апластической анемии. Получены и изучены в опытах на животных иммунотоксины к некоторым видам лейкоза 1154, 155], меланомы [156] и других злокачественных
новообразований [157]. Иммунотоксины с моноклональными антителами или их фрагментами против опухоль-специфических антигенов отличаются особенно сильной токсичностью против соответствующих опухолей [158]. Использование дополнительных средств, облегчающих разрыв фагосом внутри клетки до их попадания в лизосомы, например аденовирусов, в 100— 300 раз увеличивает токсичность конъюгатов за счет более эффективного их накопления в цитоплазме [159].
Сложности, возникающие при применении иммунотоксинов, связаны с их высокой стоимостью, недостаточной терапевтической широтой, а главное с тем, что не ко всем видам опухолевых клеток удается получить достаточно специфичные антитела. Если учесть, что в процессе опухолевого роста иммунологическая специфичность может меняться, то становится ясно, что иммунотоксины хотя и мощное, но все же не универсальное противоопухолевое средство. Поскольку иммунотоксины представляют собой чужеродные для организма белки, они могут вызывать образование антител к ним. Теоретически этого быть не должно вследствие связывания иммунотоксинами В-лимфо-цитов и последующей их гибели, что открывает путь к возникновению специфической иммунологической толерантности. В действительности некоторый иммунный ответ иммунотокснны все же вызывают. Однако если ввести в конъюгат какой-либо гаптен, то удается вызвать толерантность именно к этому гап-тену [149, 160]. Все это имеет значение не только для клинического применения иммунотоксинов (отсутствие ответа на них), но и для лечения аутоиммунных заболеваний: если антиген известен, то соответствующие лимфоциты можно было бы исключить введением конъюгата аутоантигена с A-цепью. Существуют и другие возможности для регулирования иммунного ответа иммунотоксинами.
Предварительные исследования показали, что иммунотоксины, содержащие нормальные иммуноглобулины, имеют относительно низкую токсичность [161]. Удаление их из циркуляции, по-видимому, происходит в результате поглощения макрофагами печени и селезенки, поэтому иммунотоксины не вызывают нарушений в почках. Время полужизни конъюгатов невелико («30 мин), что не всегда достаточно для достижения иммунотоксинами опухолевых клеток, расположенных за биологическими барьерами. Поэтому может оказаться необходимым временно блокировать ретикуло-эндотелиальную систему, например агрегированными иммуноглобулинами.
Размеры молекул нммунотоксинов должны быть достаточны, чтобы проникнуть в плотные ткани твердых опухолей. Поэтому желательно использовать не целые иммуноглобулины, а их фрагменты, которые можно попытаться связать с активным фрагментом А-непей. Для злокачественных клеток проблема безошибочного и селективного узнавания представляется
