Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Платэ Н.А. -> "Физиологически активные полимеры" -> 84

Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.

Платэ Н.А., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры — М.: Химия, 1986. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): fiziologicheskieaspektifiziologii1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 118 >> Следующая

Для связывания белковых молекул друг с другом (межмо-лекулярное сшивание белка) предложено большое число бифункциональных реагентов типа X — А — Y, где X и Y—¦ группы, способные реагировать с функциональными группами белка, а А — «вставка», определяющая жесткость связи и «расстояние» между белками [116—118]. Если группы X и Y одинаковы, то сшивающий реагент называют гомобифункциональ-ным, так как реакционная способность обеих его групп примерно одинакова. Если X и Y — разные группы, то возникает возможность селективного присоединения сшивающего агента к белку одним концом и после удаления избытка реагента взаимодействия другого конца с тем же или другим белком, но в иных условиях. Такие реагенты называют гетеробифункцио-нальными, и они предпочтительны почти во всех случаях, в особенности при связывании различных белков.
Основные проблемы, возникающие при сшивании белков для биомедицинского применения, можно свести к двум. Во-первых, в большинстве случаев нельзя допускать образования слишком крупных (состоящих из многих молекул белка) конъюгатов, а тем более получения плохо растворимых продуктов. Во-вто-
рых, желательно избегать возникновения внутримолекулярных сшивок, которые, хотя и стабилизируют пространственную структуру белка, часто приводят к уменьшению физиологической активности конъюгата (например, в случае гемоглобина). При получении конъюгатов двух разных белков необходимо ограничить образование смеси всех трех возможных видов продуктов реакции. Дополнительные сложности возникают при необходимости сшивания белков с субъединичной структурой, так как в результате диссоциации на мономеры или олигомеры возможно образование сложной смеси.
Для сшивания используют те же функциональные группы белков, что и для присоединения к небелковым полимерам-носителям. В основном это аминогруппы и тиольные группы, реже карбоксильные группы или ароматические ядра. Ход реакции между двумя разными белками и бифункциональным сшивающим агентом X — А — Y в общем случае определяется рядом факторов, важнейшие из которых следующие:
относительная скорость реакции сшивающего агента с растворителем и сшиваемыми белками;
относительная скорость реакции сшивающего агента с каждым из сшиваемых белков (зависит от числа и доступности реагирующих с агентом функциональных групп данного белка);
относительная скорость образования меж- и внутримолекулярных сшивок (зависит от структуры белка, концентрации сшивающего агента и жесткости его молекулы);
соотношение размеров макромолекул сшиваемых белков. Реакционная способность белка перед сшиванием может быть изменена, например предварительным тиолированием аминогрупп [119]. Сшивание простым добавлением гомобифункцио-нального сшивающего агента к смеси белков обычно приводит к получению смеси продуктов реакции и оставляет мало возможностей для управления процессом. Двухстадийная реакция-взаимодействие с бифункциональным реагентом сначала одного белка, удаление избытка реагента и добавление того же или другого белка — более управляемый процесс, особенно в случае гетеробифункциональных реагентов. В результате образование гомополимеров при сшивании двух разных белков может быть ограничено. Другой путь для достижения той же цели — взаимодействие со сшивающим агентом (можно гомо-бифункциональным) белка, биоспецифически сорбированного на нерастворимом носителе с последующей обработкой раствором Другого белка и десорбцией [120].
Если один из сшиваемых белков гликопротеин, то он может быть превращен периодатным окислением углеводной части в диальдегид и сшит с другим или тем же белком без участия Дополнительных реагентов. Для сшивания белков могут быть также использованы монофункциональные реагенты — водорастворимые карбодиимиды, реагент Вудворда и т. д., образующие
пептидную связь между соответствующими группами сшиваемых белков. Однако селективность этого метода, в особенности в отношении внутримолекулярных сшивок, оставляют желать лучшего.
По-видимому, наиболее популярным гомобифункциональным реагентом до сих пор остается глутаровый диальдегид. Он быстро и эффективно реагирует с аминогруппами белка в нейтральной или слабо щелочной среде. Возможно участие в реакции также тиольных групп. В зависимости от условий реакции образуются растворимые или нерастворимые конъюгаты.
Глутаровый диальдегид исключительно удобен для получения сшитых белков для технического применения, однако для получения ФАП он обладает принципиальным недостатком: в растворах быстро претерпевает разнообразные превращения и поэтому неоднозначно реагирует с белками. Так, в водных растворах глутарового диальдегида образуется смесь диальдегида, его гидратированных форм и полимера, различных по реакционной способности. В нейтральных и щелочных средах диальдегид претерпевает кротоновую поликонденсацию с образованием полифункционального олигомера (5.23), содержащего два вида альдегидных групп и а,p-сопряженные двойные связи [121].
_СНО _ СНО
0H4/\A/vF\/\c„0
(5.23)
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 118 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed