Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Платэ Н.А. -> "Физиологически активные полимеры" -> 78

Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.

Платэ Н.А., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры — М.: Химия, 1986. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): fiziologicheskieaspektifiziologii1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 118 >> Следующая

Большое число работ посвящено получению и изучению конъюгатов протеолитических ферментов — трипсина и террили-тина с диальдегиддекстраном [14, 59]. Были найдены условия, позволяющие полностью связывать весь введенный в реакцию с полимером-носителем трипсин, однако активность фермента при этом снижалась до 53 % от исходной по низкомолекулярному субстрату и до 26% — по высокомолекулярному (казеину) [60]. Восстановление азометиновых и альдегидных групп в конъюгате боргидридом с целью повышения стойкости к гидролизу позволило полностью сохранить ферментативную активность, в том числе фибринолитическую. Блокирование тех же групп бисульфитом или гидроксиламином приводит к отщеплению части фермента от полимера-носителя. Скорость автолиза белка в конъюгате значительно ниже, чем у исходного фермента. Конформационная стабильность конъюгата к термоинактивации также повышена. Конъюгат с соотношением фермент: полимер 2:3 обладает пониженным сродством к высокомолекулярным ингибиторам сыворотки крови человека. Введение отрицательного заряда в полимер-носитель обработкой бисульфитом способствует этому [59, 61]. Декстрановый конъюгат террили-тина обладал пониженными антигенностыо и иммуногенностью, а ингибирующее действие антител в сыворотке крови выражено слабее, что важно для медицинского применения [62].
Конъюгат террилитнна с диальдегиддекстраном [43] после восстановления борогидридом лишь немногим более стабилен к автолизу, чем нативный фермент, по-видимому, вследствие связывания белка с полимером-носителем в немногих точках. Перевод носителя в отрицательно заряженную форму с помощью бисульфита вызывает ускорение денатурации фермента в конъюгате и снижение его активности в щелочной области. Сродство восстановленного и отрицательно заряженного конъюгатов к ингибиторам сыворотки крови ниже, чем у исходного фермента, и определяется, видимо, стерическими факторами.
а-Химотрипсин как модельный фермент был присоединен к диальдегиддекстрану [63]. Фермент, связанный с полисахаридом, практически полностью сохранял свою активность по отношению к низкомолекулярному субстрату и почти не изменял кинетических параметров. Конъюгат значительно более гермо-
стабилен, чем нативный фермент. Восстановление альдиминовых связей борогидридом мало сказывается на свойствах конъюгата.
Особо следует отметить работы тех же авторов по полимерным производным стрептокиназы с полисахаридными носителями [64, 65]. Полученные конъюгаты эффективно разрушают искусственные тромбы, а конъюгат на основе диальдегиддек-страна («Стрептодеказа») — первый в мире полимерный препарат фермента, который разрешен для клинического применения и показал хорошие результаты [66]. Среди других полимерных конъюгатов протеолитических ферментов, обладающих тромбо-литическими свойствами, конъюгаты урокиназы [65, 67].
Выведение белков из циркуляции в кровяном русле (клиренс) происходит несколькими путями. Для низкомолекулярных белков — это гломерулярная фильтрация через почки, другой путь связан с расщеплением протеазами и, наконец, третий путь — эндоцитоз. Последний происходит в циркулирующих лейкоцитах и макрофагах, но наиболее важную роль в этом процессе играют клетки печени.
Клиренс белков путем эндоцитоза может быть как неспецифическим (например, фагоцитоз денатурированных белков), так и специфическим для плазматической мембраны данного типа клеток. Последнее означает, что эндоцитоз одних белков происходит быстрее, чем других, и не всегда пропорционален их относительной концентрации в межклеточной жидкости. Специфическое связывание с рецепторами клеточной поверхности происходит за счет углеводных остатков белков. Таким образом, хотя бы для некоторых гликопротеинов и, по-видимому, конъюгатов с полисахаридами наблюдается рецептор-медиируемый эндоцитоз [68]. Тем самым декстрановые и иные полисахаридные конъюгаты как аналоги гликопротеинов могут изменять эн-доцитотические свойства белков, либо увеличивая время их циркуляции в кровяном русле, либо направляя их в специфический орган или ткань. Изменения специфичности можно достичь модификацией белков соответствующими моно- или олигосахарид-ными остатками или удалением концевых остатков в гликопротеинах. Так, увеличения времени циркуляции глутаминазы — аспарагиназы из Actino bacter в 15 раз удалось достигнуть связыванием с ферментом различных гликопептидов с помощью глутарового диальдегида [69]. Введение дополнительных отрицательно заряженных групп в фермент путем сукцинилирования также увеличивает сроки циркуляции за счет снижения почечной фильтрации, но в меньшей мере.
Выведение конъюгата аспарагиназы с декстраиом (альдегидный метод, 30 % первоначальной ферментативной активности) через почки оказался существенно замедленным (в 10— 16 раз) [50]. Для других конъюгатов, причем не только дек-страновых, но и с синтетическими полимерами, получены анало-
гичные результаты [23, 45, 49]. Так, через 2 ч после внутривенного введения в циркуляции находилось 75 % декстранового конъюгата а-амилазы (для исходного фермента 16%) [45]. За 1 ч удалялось только 30 % декстранового конъюгата каталазы по сравнению с 93 % исходного фермента. При введении конъюгата внутрибрюшинно акаталазным мышам максимальная концентрация достигалась за 2 ч для каталазы, но только за 4,5 ч для ее декстранового конъюгата.
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 118 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed