Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Платэ Н.А. -> "Физиологически активные полимеры" -> 74

Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.

Платэ Н.А., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры — М.: Химия, 1986. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): fiziologicheskieaspektifiziologii1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 68 69 70 71 72 73 < 74 > 75 76 77 78 79 80 .. 118 >> Следующая

CI-
г—С(СН3)СН2-
/С\ J“Y N
N=\
'Cl
CONHCH2CH(OH)CH3J
n2h4.h2o
117 °С, 2 ч
-С(СН3)СН2-----------
CONHCH2CH(OH)CH3_
-С(СН3)СН2
/С1
N /
CONHCH2CH—О—(/ "N
I W
СН3 \
С1
-С(СН3)СН2 i'
-----j—Г—С(СН3)СН2-
ONHCH2CH(OH)CH3_L L conhnh2
1. Б—NH2, pH=8
2. NH2OH
Г—C(CH3)CH2----------j-
L CONHCH2CH(OH)CH3.L
aNO?/H+
—C(CH3)CH2-
/
NHOH
X
NHP
(6.3)
[—С(СНз)СН„----------j—r-C(CH3)CH2—-j
CONHCH2CH(OH)CH3Jx l conh— Б \y
1—Г—С(СН3)СНг-
(5.4)
C(CH3)CH2-
I
CONHCH2CH(OH)CH3Jjc Г—С(СНз)СН2-------
гг
Б—NH2
гт
L сс
CO(NHCH2CO)2 0C6H4N02 iy —Г—С(СН3)СН2------------I
;п
I
ONHCH2CH(OH)CH3Jx L CO(NHCH2CO)2NH— biy
(5.5)
Ферментативная активность полученных конъюгатов по отношению к низкомолекулярным субстратам оказалась близкой к активности исходного фермента, устойчивость к термоинактивации и аутолизу была повышена, а способность к взаимодействию с высокомолекулярным ингибитором — снижена. Таким
образом, использованные полимеры-носители эффективно защищали фермент, почти не влияя на его активность.
Ацетилхолинэстераза яда кобры была присоединена к по-ли-N- (2-гндроксипропил)метакриламиду, активированному
п-нитрофенилхлорформиатом [27]. Метод, использованный для получения конъюгата (5.6), предложен нами ранее для активации декстрана (см. гл. 3) и присоединения к нему гемоглобина. Фермент оказывается присоединенным именно к выбранному полимеру-носителю, который не содержит дополнительных функциональных групп.
[
—С(СН3)СН2------¦
CONHCH2CHCH3
I
он
п-ОгМС^Ч 4ОСОС1 c5H5N
Г---С(СН3)СН2-- --- Г---С(СН3)СН2--1
---> CONHCH2CHCH3 1
CONHCH2CHCH3
1
Lo2nc6h4ocoo X он
Б—NH2 pH —9
Г---С(СН3)СН2-- --- г С(СН3)СН2 -1
CONHCH2CHCH3 CONHCH2CHCH3
1
L Б---NHCOO X 1
L он J
(5.6)
Свойства растворимых конъюгатов ферментов с полиэлектро-литамн зависят от свойств полимера-носителя и самого фермента [28]. Это связано с формированием микроокружения белковой глобулы, отличающегося от окружающей среды. Поэтому удачный выбор полиэлектролита позволяет получать стабильные конъюгаты с измененным pH-оптимумом (полианионы сдвигают его в щелочную область, а поликатионы — в кислую). Так, значительная стабилизация формнатдегидрогеназы была достигнута ковалентным связыванием фермента с водорастворимым частично кватернизованным сополимером 4-винилпиридина с акролеином [29]. Существенную роль при этом сыграли электростатические эффекты и способность полимера-носителя связывать ионы тяжелых металлов, защищая тем самым важные для проявления активности сульфгидрильные группы.
Растворимые производные протеолитических ферментов с полианионными носителями рассмотрены в [16, 30]. Аминогруппы трипсина и а-химотрипсина образуют электростатические солевые связи с карбоксильными группами носителя (сополимер малеинового ангидрида с акриловой кислотой, полималеи-новая и полиакриловая кислоты) в результате кооперативной реакции. Число связей зависит от плотности заряда на полианионе и определяет сдвиг pH-оптимума и каталитической
константы фермента в реакции гидролиза низкомолекулярного субстрата. Образование солевых связей дестабилизирует белок по отношению к тепловой денатурации. С ростом числа связей лабильность белка увеличивается, а его конформация все более отличается от нативной.
Свойства ферментов, связанных с полианионными носителями, зависят от характера носителя и условий получения конъюгата (количества конденсирующего агента, носителя и фермента). Так, при взаимодействии а-химотрипсина с полианионами (полиакриловой и поли-Ь-глутаминовой кислотами или карбок-симетилцеллюлозой) под действием реагента Вудворда К активность растворимого конъюгата возрастает с уменьшением количества конденсирующего реагента [31]. Поскольку при этом степень связывания фермента практически не уменьшается, то для достижения максимальной активности достаточно, по-видимому, одноточечного связывания; образование же последующих связей снижает активность.
Конъюгат пепсина с растворимым сополимером этилена с малеиновым ангидридом оказался стабильным при хранении, несмотря на то, что белок был связан с полимером в 1—2 точках, в основном через е-аминогруппу единственного лизинового остатка [32]. К одной молекуле полимера, по-видимому, была присоединена только одна молекула фермента. При этом рН-профиль активности конъюгата был сдвинут на 1,5 ед. pH в щелочную область. Ферментативная активность конъюгата по отношению к высокомолекулярному субстрату (восстановленному молоку) была невелика — всего 8—14% от исходной в зависимости от pH, но термостабильность возросла в 2,5—5 раз. В то же время термостабильная кислая протеаза из Penicillinum duponti К 1014, связанная карбодиимидным методом с сополимером этилена с малеиновой кислотой (1:1), показала довольно высокую протеолитическую активность по отношению к казеину: 34% от исходной при 30 °С и 70% при 75 °С. Следовательно, низкая активность полимер-ферментных конъюгатов, обусловленная стерическими препятствиями, не является их непременным свойством [33].
Предыдущая << 1 .. 68 69 70 71 72 73 < 74 > 75 76 77 78 79 80 .. 118 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed