Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.
Скачать (прямая ссылка):
Дальнейшее приближение к вакцинам против практически важных заболеваний получено на примере вируса гриппа [223]. Синтетический пептид, соответствующий последовательности 91-108 гемагглютинина этого вируса, присоединен к столбнячному токсоиду и полученный конъюгат введен животным в полном адъюванте Фрейнда. Продуцируемые в ответ антитела показали заметную кросс-реактивность к интактному вирусу штамма А/Тех/77 и ингибировали гемагглютинацию эритроцитов вирусом. Эти, а также некоторые другие результаты указывают на эффективность конъюгата в стимуляции противогриппозного иммунного ответа. Аналогично построенная вакцина получена на основе синтетических пептидных фрагментов субъединицы В холерного токсина и столбнячного ток-
соида [224]. Она способна эффективно вызывать выработку антител, нейтрализующих действия холерного токсина.
Следующий шаг связан с успешной иммунизацией с помощью синтетической дифтерийной вакцины [225]. Предварительно было показано, что тетрадекапептидная последовательность 188-201 дифтерийного токсина (фрагмент «петли»), присоединенная к белковому носителю, оказывают противотоксиче-ское действие при дифтерии в случае иммунизации в полном адъюванте Фрейнда. Этот пептид, а также три его аналога были присоединены к различным носителям: бычьему сывороточному альбумину, яичному альбумину, упоминавшемуся мультицепному полимеру или к тому же полимеру, содержащему ковалентно связанный мурамилдипептид. Кроме того, пептиды были сополимеризованы с глутаровым диальдегидом в регулярные полипептиды. На моль полимера-носителя с М = = 100 тыс. содержалось 4,5—4,6 моль пептида. Антисыворотка, полученная при иммунизации животных конъюгатами, содержала антитела против упомянутого фрагмента «петли». Наиболее эффективным оказался полностью синтетический антиген со встроенным иммуноадъювантом. Поскольку по меньшей мере одно производное мурамилдипептид а (мурабутид) пригодно для введения человеку, использование синтетических вакцин, по-видимому, дело недалекого будущего. Однако еще остается много нерешенных вопросов, таких как длительность иммунной защиты, оптимальная конструкция и состав полимерного конъюгата и т. д.
Описанный здесь принцип конструирования искусственных антигенов в последнее время применен для создания поливалентных вакцин, защищающих одновременно от нескольких видов инфекций [226]. Так, синтетические пептиды, фрагменты дифтерийного токсина, белка М стрептококка типа 24 и антигена поверхности вируса гепатита В связаны вместе с одним и тем же носителем — столбнячным токсоидом. В опытах на животных получены высокие титры антител к каждому из присоединенных антигенов без перекрестных взаимодействий друг с другом.
Во многих случаях, особенно при бактериальных инфекциях, иммуногенная детерминанта имеет полисахаридный характер. Выделение или синтез повторяющихся фрагментов таких полисахаридов представляет собой сложную задачу. Для получения искусственных или синтетических антигенов с детерми-нантными группами олигосахаридного характера повторяющиеся фрагменты полисахаридов связывают (обычно через «вставку») с белком или синтетическим полимером, причем структура ни одного из сахарных остатков не должна быть нарушена. Показано, что конъюгаты антигенного олигосахарида сальмонеллы с белком вызывают образование антител и защиту против инфекции этими бактериями [227, 228]. Синтетические
трисахариды в виде |3-(/г-аминофенил)гликозидов были конъюгированы диазотированием и азосочетанием с белком эдестином с образованием антигенов (4.79) и (4.80) [227]. В антисыворотках, полученных при иммунизации кроликов этими антигенами в полном адъюванте Фрейнда, обнаружены специфические антитела против серологического О-фактора 3, для которого характерно повторяющееся звено, как в (4.79), причем антиген (4.80) в этом случае был на 2—3 порядка менее активен.
D—Man—(pl-s-4)—L—Rha—(al->3)—D—Galpl— OC6H4N=N—Б (4.79)
D—Glu—(P1 ->4)—L—Rha—(al->3)—D—Gal p 1— OC6H4N=>J—Б (4.80)
Аналогично были получены другие синтетические и искусственные олигосахаридные антигены, содержащие ди- или три-сахариды как гаптены, «вставку» и белковый носитель [229, 230], хотя способы соединения олигосахаридной части с белком были другие. Однако такие антигены не вполне адекватны природным полисахаридным антигенам, так как моделируют только специфичность, но не сам процесс иммунного ответа. Природные полисахаридные антигены Т-независимы, а синтетические олигосахаридные антигены на основе белка Т-зависимы. Для получения моноспецифических Т-независимых олигосаха-ридных антигенов и с целью исключения нежелательного биосинтеза антител против белковой части молекулы был предложен новый принцип создания синтетических олигосахаридных антигенов: сополимеризация аллилгликозидов специфических олигосахаридов с гидрофильным мономером с образованием линейных псевдополисахаридов (4.81) [231, 232]
Синтетические антигены оказались высоко специфичными по отношению к антисывороткам сальмонелл соответствующих олигосахаридам групп и предложены как монофакторные диагностические препараты. Применение синтетических полиэлектролитов (ср. гл. 5) в комплексах с белками позволило получить высоко иммуногенные синтетические антигены [233]. По-лиэлектролитные носители обеспечивали Т- и 1г-независимость, а присоединенный антиген — специфичность иммунного ответа. Конъюгацией О-антигена из сальмонелл с указанными носите-
