Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 7.2. Кинетика лизиса нестабилизированного фибрина комплексами иммобилизованного гепарина с фибриногеном (/), тромбином (2), фибринолизином (3) и сывороточным альбумином (4)
Рис. 7.3. Кинетика лизнса стабилизированного фибрина полимерами, содержащими 2,95 мг/г гепарина (/), 0,46 мг/г трипсина (2), 0,29 мг/г трипсина и 1,43 мг/г гепарина (3), 0,46 мг/г трипсина и 3,15 мг/г гепарина (4), 1,29 мг/г Трипсина (5) и 1,29 мг/г и трипсина и 1,5 мг/г гепарина (6)
На основании этих данных был сделан вывод, что иммобилизованный гепарин способен взаимодействовать с ?еми же белками, что и гепарин в растворе, т. е. иммобилизация не сопровождается существенным изменением физиологических функций гепарина. К таким функциям прежде всего относится ингибирование гепарином процесса превращения фибриногена в фибрин под действием тромбина, а также способность комплексных соединений гепарина с некоторыми белками плазмы участвовать в лизисе нестабилизированного фибрина. В работе [67] было оценено тромбиновое время для иммобилизованного гепарина и гепарина в растворе. Для обоих соединений этот параметр имел одно и то же значение (20±2 с/мг гепарина), что свидетельствует о полном сохранении гепарином антикоагулянтных свойств при иммобилизации.
На рис. 7.2 представлены результаты изучения литического действия комплексов иммобилизованного гепарина на неста-¦билизированный фибрин [60]. Из этого рисунка видно, что и по характеру литического действия иммобилизованный гепарин мало отличается от гепарина в растворе: наиболее активными ¦в реакции лизиса являются комплексы иммобилизованного гепарина с фибриногеном и тромбином. Замедление скорости лизиса по мере протекания реакции позволило авторам работы [58] предложить наиболее вероятный механизм этого явления, ¦который заключается в связывании комплексами иммобилизованного гепарина растворимого фибрин-мономера (равновесная концентрация этого вещества составляет 6,3 -10—8 моль/л) с последующим превращением связанного фибрин-мономера в неспособные вступать в дальнейшую полимеризацию с образованием фибрина соединения. При этом в результате обратимости перехода фибрин-мономера в нестабилизированный фибрин рав-
новесие смещается в сторону образования фибрин-мономера, т. е. растворения нестабилизированного фибрина. Замедление скорости лизиса, по-видимому, обусловлено тем, что часть продуктов превращения фибрин-мономера связывается с комплексами гепарина и ингибирует действие последних.
Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что иммобилизованный гепарин способен выполнять все функции (антикоагулянтные и литические) гепарина в растворе. Следовательно, механизм повышенной гемосовместимости полимеров, модифицированных ковалентным присоединением гепарина, заключается в эффективном предотвращении свертывания граничащих с полимером слоев крови. Кровь в этих слоях находится в псевдогепаринизированном состоянии, отличие которого от истинно гепаринизированного состояния заключается в том, что гепарин хотя и контактирует непосредственно с кровью, но прочно связан с нерастворимым полимером. Все это приводит не только к предотвращению тромбообразования на полимерной поверхности, но и к быстрому восстановлению в живом организме всех параметров свертывающей системы после прекращения контакта крови с полимером без специального введения антагонистов гепарина.
Вместе с тем вне сферы действия иммобилизованного гепарина остаются такие стадии, как адгезия тромбоцитов и лизис стабилизированного фибрина. И хотя, как показано в работе [68], сорбированные тромбоциты не претерпевают изменений и не оказывают существенного влияния на процесс формирования фибринового сгустка, это не исключает возможности образования «белого тромба» — ассоциатов тромбоцитов. Поскольку повышенная адгезия тромбоцитов на ГСП (табл. 7.1) обусловлена концентрированием на поверхности этих полимеров фибриногена за счет комплексообразования этого белка с иммобилизованным гепарином, то для решения этой проблемы в работе [69] предложено иммобилизовать на полимерной поверхности одновременно с гепарином протеолитические ферменты, способные гидролизовать адсорбированный фибриноген. Наличие на поверхности полимера таких ферментов обеспечивает также эффективное воздействие на фибриновый сгусток в случае его образования, например в сложных конструкциях в области застойных зон крови (рис. 7.3). Из рисунка видно, что с увеличением содержания в полимере иммобилизованного трипсина лизирующая способность полимеров повышается, а эффективность лизиса бинарными системами выше, чем системами с одним иммобилизованным трипсином. Таким образом, при использовании бинарных систем наблюдается взаимное влияние трипсина и гепарина, выражающееся в усилении гепарином ли-тического действия трипсина и в усилении трипсином антикоа-гулянтного действия иммобилизованного гепарина. Последнее было продемонстрировано в работе [69] при исследовании
Параметр Значение Значение параметра после контакта
параметра до с полимером в течение 30 мнн
