Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Платэ Н.А. -> "Физиологически активные полимеры" -> 107

Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.

Платэ Н.А., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры — М.: Химия, 1986. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): fiziologicheskieaspektifiziologii1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 118 >> Следующая

димеры с М = 32 тыс., которые и выводятся. Поэтому прежде всего необходимо увеличить размеры молекул Нв и (или) предотвратить их диссоциацию на димеры, чтобы увеличить время циркуляции при возможно более полном сохранении так называемых кислород-транспортных свойств, а затем уже приблизить эти свойства к свойствам Нв внутри эритроцита.
Впервые принципиальное решение на первом этапе создания КЗПК было достигнуто советскими исследователями [13—16]. Для эффективного увеличения размеров молекулы Нв последний был модифицирован различными декстранами с Mw до 250 тыс. Связывание Нв с полимером (так же, как и сшивание белковых макромолекул) сопряжено со специфическими трудностями: конформация молекул Нв в лигандированной форме, в частности в оксиформе, иная, чем в нелигандировапной дез-окси-форме. Это происходит за счет изменения взаимного расположения четырех субъединиц белка, которые связаны между собой нековалентными связями. Тонкие механизмы функционирования Нв и его способность реагировать изменением сродства к 02, кооперативности и других эффектов, а в конечном итоге — изменением газотранспортной способности на изменение pH, Рсо* и других факторов в организме — также связаны с изменением конформации Нв. Склонность Нв к аутоокислению, относительно небольшая в физиологических условиях, повышается при его модификации.
Модифицирующий полимер может быть связан как с просте-тическими группами Нв, темами, так и с белковой частью — глобином. Для модификации по гемам используется свойство глобина вступать в специфическую реакцию с гемином (Fe3+-форма гема) с образованием после восстановления Нв, не отличимого от исходного («ресинтез» Нв). Упомянутые авторы показали, что модификация гемина по карбоксильным группам мало сказывается на свойствах полученного из него Нв [17]. Карбодиимидным методом был синтезирован полимерный сложный эфир гемина и декстрана, причем были найдены условия, позволяющие получать гемин-полимер, способный к «ресинтезу» с глобином [14]. «Ресинтез» и восстановление привели к Нв, модифицированному декстраном по карбоксильным группам гемов [15]. Вследствие пространственных затруднений ге-мин, связанный с полимером, сочетался только с тремя субъединицами Нв из четырех, поэтому в четвертую субъединицу (одну из (5-цепей) вводили немодифицированный гемин. В результате был получен Нв, связанный с декстраном в 3—6 заранее заданный точках. На 3—4 макромолекулы Нв в конъюгате с М — 250 тыс. и Мп— 117 тыс. приходилось в среднем
1—2 макромолекулы декстрана с Мш — 60—70 тыс. [18]. Конъюгат сохранял способность к обратимой оксигенации и на 80 % способность исходного Нв к транспорту кислорода in vitro. Он циркулировал в кровяном русле животных втрое дольше, чем
исходный Нв в той же дозе (3 г/кг), причем Нв в конъюгате находился в функционально-активном состоянии. Введение раствора конъюгата смертельно обескровленным животным норма-лизовывало артериальное давление и сердечную деятельность. Гистологических изменений при повторном введении конъюгата найдено не было. В конъюгате были полностью сохранены иммунологическая специфичность Нв и отсутствие антигенности.
Таким образом, впервые была доказана принципиальная возможность модификации белка полимером со значительной степенью сохранения его функциональных свойств при одновременном увеличении времени циркуляции конъюгата в опытах in vivo. Использованный способ связывания Нв с полимером представляет собой один из немногочисленных методов направленной модификации белка в заранее заданных точках. Недостатком конъюгата, как и других описанных ниже полимерных производных Нв, является наличие «балластного» полимера. В результате даже разбавленные растворы конъюгата имели высокую вязкость, а их способность к переносу кислорода на единицу объема была невысока.
В других работах той же группы советских исследователей Нв связывали различными методами с декстраном через аминогруппы его белковой части [19—21]. В качестве активированных полимеров были использованы диальдегиддекстран, N-гидр-оксисукцинимидный эфир О-карбоксилдекстрана и декстран, активированный бромцианом, а также декстраны с карбоксил-и альдегидсодержащими «вставками». Полученные конъюгаты были способны к обратимой оксигенации, а их кислородтранс-портные свойства, устойчивость к аутоокислению и тепловой денатурации варьировали в зависимости от способа активации декстрана и вводимой в реакцию формы Нв (окси- или дез-окси-). С диальдегиддекстраном, например, был получен конъюгат со сродством к Ог, близким к сродству Нв в растворе, однако с высокой аутоокисляемостью (50 % мет-формы образовалось за 8 ч in vitro). Бромциановым методом был синтезирован конъюгат с кислородтранспортными свойствами, близкими к свойствам Нв, при 50%-ном содержании белка в конъюгате и с высокой устойчивостью к аутоокислению (2—6 % мет-формы при хранении лиофилизата в течение нескольких месяцев)'. Однако время циркуляции конъюгата в кровяном русле животных было невелико — всего 6 ч. Позже другими авторами было показано, что замена исходного декстрана с A4ra=10 тыс. (Mw— ~ 15—60 тыс. для полимера, активированного бромцианом, и 200—300 тыс. для продукта его реакции с Нв) на гидроксиэтил-крахмал с Mw = 50—700 тыс. приводит к увеличению сроков Циркуляции конъюгата в кровяном русле [22].
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 118 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed