Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Паушева З.П. -> "Практикум по цитологии растений " -> 86

Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.

Паушева З.П. Практикум по цитологии растений — М.: Агропромиздат, 1988. — 271 c.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка): praktiumpocitologii1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 80 81 82 83 84 85 < 86 > 87 88 89 90 91 92 .. 110 >> Следующая

Удобный объект для проращивания пыльцы в камерах Ван-Тигема— примула.
При проращивании пыльцы кукурузы можно добавлять к питательной среде свежий куриный желток. Среду готовят из растворов 1%-го агар-агара и 17%-го сахарозы. На 10 мл этой среды добавляют 1 каплю желтка. На дно камеры помещают 0,5 см2 влажной фильтровальной бумаги. Проращивают пыльцу при 24—26 °С.
Метод Д. А. Транковского. В качестве влажных камер для проращивания пыльцевых зерен используют бактериологические чашки с увлажненной фильтровальной бумагой или стеклянные колпаки. Искусственную среду, состоящую из 1%-го раствора агар-агара и тростникового сахара различной концентрации, наносят на предметное стекло. Сверху высевают пыльцу из зрелых пыльников. Затем предметные стекла помещают во влажную камеру. Проросшие пыльцевые зерна фиксируют по Навашину с добавлением в фиксатор тростникового сахара в такой же концентрации, как в искусственной среде, или несколько больше.
Через 2—3 мин препараты переносят в свежий фиксатор на 1—1,5 часа, затем промывают водой, протравливают железоаммонийными квасцами, окрашивают гематоксилином по Гейден-гайну, обезвоживают в спирте, заключают в ксилол и бальзам.
В. А. Поддубная-Арнольди использовала для окраски пыльцевых трубок in vitro ацетокармин и фиксацию по Карнуа с последующей окраской гематоксилином по Делафильду (см. с. 87) или Эрлиху.
Некоторые исследователи, чтобы изучить действие облучения на пыльцу и накопить клетки в стадии метафазы при исследовании митозов в пыльцевых трубках, добавляют в искусственную среду колхицин 0,05%-й концентрации или в чашки Петри, в которых находятся препараты с проросшей пыльцой, помещают кристаллы аценафтена. Пары аценафтена ингибируют веретено деления.
Оба рассмотренных метода проращивания пыльцы на искусственной среде во влажных камерах пригодны не для всех культур, так как могут давать заниженные результаты. Успех работы во многом определяется стерильностью посуды и растворов.
Метод В. С. Шардакова. Он основан на выявлении фермента пероксидазы в жизнеспособных пыльцевых зернах. Непосредственно перед исследованием готовят четыре свежих раствора, которые помещают в темную посуду:
А— 0;20 г бензидина основного растворяют в 100 мл 50%-го раствора этилового спирта;
Б — 0,15 г а-иафтола растворяют в 100 мл 50%-го раствора этилового спирта;
В — 0,25 г карбоната натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды;
Г— 0,3%-й растврр перекиси водорода (в капельнице).
Первые три раствора (Л, Б, В) перед началом работы смешивают в равных объемах и наливают в капельницу. Пыльцу помещают на предметное стекло в каплю этой смеси и добавляют каплю перекиси водорода. В присутствии бензидина живая пыльца, содержащая пероксидазу, окрашивается в ярко-розовый или темно-красный цвет.
Погибшая пыльца не окрашивается.
Однако этот метод дает завышенные результаты при исследовании хранившейся пыльцы.
Метод П. И. Диакону. Этот метод был разработан в ТСХА. О жизнеспособности судят по наличию активных дыхательных ферментов дегидрогеназ, в присутствии которых бесцветный раствор 2,3,5-трифенилтетразол хлорида восстанавливается в формазан ярко-красного цвета. Погибшие пыльцевые зерна остаются бесцветными.
Необходимы следующие растворы;
1-й. Vis М раствор Na2HP04-2H20;
2-й. Vi5M раствор КН2Р04;
3-й. Фосфатный буфер Сёренсена (pH 7,17); для его получения соединяют 70 мл V15 М раствора Na2HP04-2H20 и 30 мл Vis М раствора КИ2РО4;
4-й. 0,5—0,1%-й раствор 2,3,5-трифенилтетразол хлорида в Vis М фосфатном буфере Сёренсена с pH 7Д7 (в качестве буфера используют 3-й раствор).
Пыльцевые зерна помещают в одну-две капли раствора 4, накрывают покровным стеклом и ставят в термостат при 37 °С на 20—30 мин. Под микроскопом просматривают пять полей зрения в каждом из 3—5 препаратов. Окрашенные в красный цвет пыльцевые зерна относят к жизнеспособным.
Метод дает четкие результаты при работе со многими сельскохозяйственными культурами.
Метод флуоресцентной микроскопии. Флуорес-цин диацетат растворяют в ацетоне (10 мг в 5 мл) и две-три капли добавляют к нескольким мл 10%-то раствора сахарозы (для злаков—30%), до появления молочного оттенка. Наносят раствор сахарозы на предметное стекло, проводят посев пыльцы, накрывают покровным стеклом и изучают препарат под люминесцентным микроскопом с голубыми фильтрами в течение 10 мин. Живые пыльцевые зерна флуоресцируют. Этот метод предложили Дж. и И. Хеслоп-Харрисоны в 1970 г.
Выявление нередуцированных пыльцевых зерен
У картофеля многие диплоидные виды образуют иередуцирован-ные гаметы (2п вместо п), что используют в селекции для облегчения скрещивания их с тетраплоидными видами, последние в норме образуют диплоидные гаметы (2п). Анализ пыльцевых зерен у диплоидных видов картофеля выявил различие их по величине в зависимости от уровня плоидности. Гаплоидные пыльцевые зерна (п) имели размер 18—23 мкм, а диплоидные (2п) — 26—33 мкм.
Для анализа пыльцу вытряхивают из пыльников на предметное стекло, окрашивают 'ацетокармином или йодом, измеряют под микроскопом для выявления отличий в размере гаплоидных и диплоидных пыльцевых зерен, а затем отбирают растения с учетом анализа.
Предыдущая << 1 .. 80 81 82 83 84 85 < 86 > 87 88 89 90 91 92 .. 110 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed