Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Паушева З.П. -> "Практикум по цитологии растений " -> 84

Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.

Паушева З.П. Практикум по цитологии растений — М.: Агропромиздат, 1988. — 271 c.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка): praktiumpocitologii1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 110 >> Следующая

Ацетокарминовый метод. Фиксируют соцветия со зрелой пыльцой в фиксаторе Карнуа. Продолжительность фиксации колеблется от 30 мин до нескольких часов. Материал промывают ихранят в 80%-м растворе этилового спирта. После хранения пыльник выкладывают на предметное стекло и раздавливают в капле ацетокармина. Убрав лишние ткани, препарат накрывают покровным стеклом и осторожно подогревают на спиртовке.
Можно определить фертильность пыльцы ацетокарминовым методом без предварительной фиксации, т. е. используя свежие пыльники. Нередко материал фиксируют в уксусном алкоголе (3: 1), а затем пыльцевые зерна сразу окрашивают ацетокармином.
У фертильных пыльцевых зерен зернистая цитоплазма и спермин окрашены в густой карминово-красный цвет. Стерильные пыльцевые зерна почти не окрашиваются ацетокармином или окраска неравномерна. Их содержимое часто отходит от оболоч-
Рис. 81. Пыльцевые зерна пшеницы после окраски ацетокармином:
А — фертильное; 1 — спермин; Б — стерильное пыльцевое зерно; 1 — содержимое пыль* цевого зерна отошло от оболочки; 2 — погибающие вегетативное и генеративное ядра.
А
Б
ки и находится на разных стадиях отмирания. Спермиев в таких пыльцевых зернах нет (рис. 81).
Результаты исследования пыльцевых зерен заносят в таблицу:
Объект исследо Номер поля Число пыльцевых зерен
фертильных стерильных

Указанные различия между фертильными и стерильными пыльцевыми зернами нетрудно установить, если пыльца имеет тонкую экзину. Толстая экзина маскирует содержимое пыльцы.
У многих культурных видов растений спермии образуются не в пыльце, а в пыльцевых трубках во время их прорастания в столбике. В таких случаях о фертильности пыльцевых зерен приходится судить относительно — по окрашиванию их содержимого.
При проведении пыльцевого анализа на фертильность учитывают, что пыльцевые зерна в одном соцветии могут быть иа ранных этапах развития. Так, в колосе пшеницы в одних цветках пыльцевые зерна со спермиями, а в других — они недозрелые, с одним-двумя ядрами, Еще более усложняется картина при изучении отдаленных гибридов.
Кихара в 1959 г. выявил у гибрида Triticum aestivumxAegi-lops caudata пять типов пыльцевых зерен: нормальные, с одним вегетативным ядром и двумя эллиптическими ядрами спермиев; почти нормальные, с одним вегетативным и двумя округлыми ядрами спермиев; двухъядерные; одноядерные; абортивные, или стерильные. Из этих пяти типов только первый обладал фертильностью.
Йодный метод. У некоторых культур, например у гречихи, пыльцевые зерна имеют толстую экзину, через которую трудно увидеть спермии при окрашивании ацетокармином. Удобнее йодный метод определения фертильности пыльцы. В основе его лежит определение крахмала при помощи йодной реакции. Фертильные и стерильные пыльцевые зерна отличаются по содержанию крахмала. Обычно фертильное пыльцевое зерно гречихи полностью заполнено крахмалом, а стерильное не имеет его сов-, сем или содержит следы (рис. 82).
Приготовление реактива, йодный раствор готовят по рецепту Грама: 2 г йодида калия растворяют в 5 мл дистиллированной воды при нагревании. Затем в раствор добавляют 1 г металлического йода, доводят до 300 мл и хранят в склянке из оранжевого стекла.
Зрелые пыльники вскрывают двумя иглами на предметном стекле, смачивают йодным раствором и, удалив лишние ткани,
Рис. 82. Пыльцевые зерна гречихи после окраски йодом:
1 — фертильное; 2 — стерильное.
накрывают покровным стеклом. Под микроскопом можно легко отличить фертильные пыльцевые зерна по темно-фиолетовому (почти черному) цвету. Стерильные пыльцевые зерна остаются неокрашенными, так как не содержат крахмала или имеют его следы. Неокрашенными оказываются и оболочки пыльцевых зерен.
У злаков рассматривают весь пьгльник целиком, чтобы не допустить ошибок в определении стерильных пыльцевых зерен, за которые по неопытности можно принять оболочки разрушенных пыльцевых зерен.
По содержанию крахмала пыльцевые зерна кукурузы делят на группы. Так, установлено, что содержание крахмала связано со степенью развития мужского гаметофита. Если формирование спермиев закончено, количество крахмала соответствует норме. Пыльцевые зерна с незавершенным развитием имеют крахмала меньше нормы. В двухклеточной пыльце присутствуют следы крахмала, а в одноядерной—или следы крахмала, или его нет совсем, Синтез крахмала в стерильном пыльцевом зерне не достигает нормы. Обнаружено также, что пыльцевые зерна, несущие спермин, не всегда фертильны, даже если в них есть крахмал (Л. И. Орел, 1967).
Методика окрашивания следующая. Пыльник кукурузы просветляют в 10%-м растворе гидроксида калия и при необходимости фиксируют в уксусном алкоголе (3:1). Крахмал выявляют в растворе хлоралгидрата (5 г хлоралгидрата смешивают с 2 мл воды и добавляют кристаллический йод до насыщения) или используют йодид калия с металлическим йодом (в 100 мл воды растворяют 3 г йодида калия, затем 0,2 г йода).
Предложен метод заключения пыльцевых зерен в агареt 410 удобно в цитологической практике. Для этого I г агара растворяют в 50 мл воды и кипятят 3 мин. В агар добавляют 6 мл йодшн о раствора (0,3 г йода и 1 г йодида калия в 100 мл воды) и 14 мл
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 110 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed