Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Хлопчатник. Семена замачивают в касторовом масле на сутки, затем промывают и ставят в чашках Петри в термостат при температуре 29—30°С на проращивание. Кончики корней длиной 7—8 мм обсушивают фильтровальной 'бумагой и фиксируют в смеси Левитского (5 ч. 1%-го раствора хромовой кислоты и 5 ч. 10%)-го раствора формалина) в течение 24 ч. Затем их 4 ч промывают в воде и обезвоживают в спирте.
Хранят объекты в 70%-м растворе спирта. Мацерируют их в 20%-м растворе NaOH, а затем окрашивают.
Приготовление красителя. Растворяют 4 г гематоксилина и 1 г железоаммонийных квасцов в 100 мл 45% -го раствора уксусной кислоты. Краситель ставят в теплое место для созревания на 7 сут.
Корни помещают в краситель и ставят в термостат при температуре 40°С. Окрашивание длится более 3 ч. Затем объект раздавливают на предметном стекле в смеси глицерина и концентрированного водного раствора хлоралгидрата (1:2).
Лук. Корни лука обрабатывают 0,2%-м раствором колхицина на протяжении 2 ч, фиксируют уксусным алкоголем, а затем гидролизуют в 1 н. растворе соляной кислоты при 60РС 7 мин и окрашивают реактивом Шиффа.
Томат. Для фиксации берут проростки семян с корнями длиной 6—8 мм. Предварительно обрабатывают их колхицином
0,005%-й концентрации в течение 1,5 ч. Фиксируют уксусным алкоголем, окрашивают ацетокармином.
Огурец. Для фиксации отбирают проросшие семена с корнями длиной 20—25 мм. Предварительно их обрабатывают насыщенным раствором а-бромнафталина в течение 1,5—2 ч на холоде, фиксируют уксусным алкоголем, окрашивают ацетокармином.
Капуста,' редис. Семена проращивают при 25°С с использованием раствора Кнопа. Фиксируют материал при той же температуре в ледяной уксусной кислоте в течение суток. В фиксатор добавляют ацетоорсеин из расчета 5—10 капель на 10 мл ледяной уксусной кислоты. Используют 2%-й раствор ацетоорсеина, который готовят на 45%-й уксусной кислоте. Окрашивание в таком красителе длится двое суток. Объекты раздавливают в глицерине.
Плодовые культуры. Молодые корни, листочки, усы фиксируют в уксусном алкоголе 2—3 ч (до суток), промывают в 96%-м растворе спирта, протравливают 2—20 мин в 4%-м растворе железоаммонийных квасцов, промывают в дистиллированной воде и помещают в ацетгематоксилиновый краситель, подогревая его два-три раза до закипания. Затем объект помещают на предметное стекло в каплю глицерина, подогревают, накрывают покровным стеклом и раздавливают.
Приготовление красителя. Растворяют 1 г гематоксилина в 50 мл дистиллированной воды, подогревая Их па водяной бане. Раствор оставляют на свету при доступе воздуха в течение трех суток, а потом к нему приливают 50 мл уксусной кислоты. В дальнейшем краситель хранят в темной посуде. Перед употреблением в него добавляют несколько капель ацетата железа или помещают железный предмет на несколько секунд.
Метод применяют в работе с вишней, сливой, черешней, смородиной, виноградом,яблоней и грушей.
Для подготовки препаратов смородины, крыжовника, малины, земляники, яблони, винограда в Центральной генетической лаборатории имени И. В, Мичурина использовали следующую методику.
1. Фиксация корней или зачаточных листочков в уксусном алкоголе (3:1) 30 мин без предварительной обработки.
2. Обработка проб разведенной соляной кислотой (соотношение кислоты и воды 1:1).
3. Промывание в воде на предметном стекле. Излишки воды удаляют фильтровальной бумагой.
4. Окрашивание основным фуксином при подогревании. Для приготовления красителя 0,5 г фуксина растворяют в 100 мл кипящей воды.
5. Удаление избытка красителя 45%-м раствором уксусной кислоты с последующим промыванием в воде.
6. Приготовление давленого препарата в глицерине.
МУТАЦИИ
Методы выявления
Несмотря на то что хромосомы каждого кариотипа обладают постоянством числа, формы и внутренней структуры, они способны изменяться спонтанно или под влиянием различных агентов: ионизирующих излучений (рентгеновского, нейтронного н альфа-, бета-, гамма-излучений радиоактивных изотопов) и химических веществ.
Изменения в хромосомах, передающиеся потомству, принято называть мутациями. Этот термин впервые ввел де Фриз. Мутации вызывают изменение самых различных признаков у растений. Значение мутаций в эволюции и селекции 'растений как источника изменчивости считается общепризнанным. Поскольку спонтанные мутации возникают очень редко, селекционер стремится их индуцировать воздействием радиации и химических мутагенов.
Огромный вклад в развитие исследований по мутагенезу внесли отечественные ученые: по радиационному — Н. П. Дубинин, по химическому — И. А. Рапопорт. Первые доказательства влияния радиации на возникновение мутаций получили в СССР Г. А. Надсон и Г. С. Филиппов в 1925 г. и в США Г. Мёллер в 1927 г.
Изменения, возникающие в хромосомах, могут быть различными. По характеру преобразования генотипа различают генные, или точковые, мутации. Они представляют собой изменения отдельных участков хромосом на молекулярном уровне и невидимы в световой микроскоп. Другую группу составляют перестройки хромосом (структурные мутации), которые можно изучать под микроскопом. Их возникновение связано с фрагментацией и перекомбинацией хромосом (рис. 64). В третью группу входят геномные мутации. Они связаны с изменением числа геномов (полиплоидия) или хромосом (анеуплоидия).
