Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Паушева З.П. -> "Практикум по цитологии растений " -> 67

Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.

Паушева З.П. Практикум по цитологии растений — М.: Агропромиздат, 1988. — 271 c.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка): praktiumpocitologii1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 110 >> Следующая

Эту методику использовали в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева (ТСХА) для подсчета и анализа хромосом у диплоидной и тетраплоидной ржи, а также для выявления аиеуплоидов.
Гречиха. Корни фиксируют в уксусном алкоголе, промывают в двух сменах 96%-го раствора этилового спирта по 30 мин и оставляют на хранение в 70%-м его растворе в холодильнике при 3—4°С.
Из 70%-го раствора этилового спирта материал переносят в 3%-,й раствор перекиси водорода на 30 мин, а затем в ацето-орсеин, содержащий соляную кислоту, на 6—8 суток при температуре 3—4°С.
Замечено, что для окрашивания корней тетраплоидов требуется больше времени, чем диплоидов.
Окрашенные кончики корней с зоной деления около 1 мм после отделения и удаления остальной части корня раздавливают на предметном стекле в свежей капле ацетоорсеина.
Приготовление красителя. К 2 г орсеина добавляют 50 мл ледяной уксусной кислоты и оставляют на ночь. Утром нагревают до кипения. К остывшему раствору приливают 50 мл дистиллированной воды и снова нагревают до кипения. Через сутки краситель фильтруют и добавляют к нему нормальную соляную кислоту в соотношении 9:1. Рекомендуется фильтровать краситель перед каждым употреблением.
Метод позволяет не только проводить подсчет хромосом, но и изучать их перестройки (Ткачева, Довженко, 1968).
Для приготовления временных препаратов можно использовать в качестве красителя ацетолакмоид. По методике Соболева и Адамчук, берут 4 г лакмоида, растворяют в 200 мл 45%-го раствора уксусной кислоты при кипячении с обратным холодильником. Корни выдерживают в красителе 2—3 суток при комнатной температуре. Мацерация происходит при кипячении объекта в растворе ацетолакмоида. После этого готовят обычный давленый препарат.
Картофель. Семена проращивают в чашках Петри на влажной фильтровальной бумаге, а клубни — в кристаллизаторах с опилками. До фиксации отрезанные корни обрабатывают водными растворами: колхицина 0,01 %-й концентрации в течение 5 ч или 8-оксихинолина 0,02%-й концентрации на протяжении 2—2,5 ч. Промытые в 96%-м растворе спирта корни переносят в уксусный алкоголь (3:1) или фиксатор Батталья (5:5: 1 : 1). Продолжительность фиксации от 1 до 6 ч в уксусном алкоголе и 5 мин в фиксаторе Батталья, но в последнем корни можно оставить на длительное хранение.
Из фиксатора корни переносят сначала на 10 мин в 1 н. раствор соляной кислоты для промывки, а затем для гидролиза помещают в 50%-й ее раствор на 2 ч, окрашивают объект реактивом Шиффа не менее 15 мин при комнатной температуре. Затем корни, промытые в 45%-м растворе уксусной кислоты, помещают на предметное стекло в каплю той же кислоты и удаляют у них неокрашенную часть. Оставшуюся на стекле зону деления корня разрезают на несколько частей, накрывают покровным стеклом и легким постукиванием заостренной спичкой добиваются равномерного распределения клёток в один слой. Метод можно использовать не только для подсчета хромосом, но и изучения их морфологии (см. рис. 57).
Сахарная свекла. В лаборатории генетики и цитологии Всесоюзного научно-исследовательского института сахарной свеклы для подсчёта хромосом у сахарной свеклы фиксируют молодые, обычно этиолированные, листочки длиной 3— 4 мм в уксусном алкоголе в течение 1,5—2 ч. Зятем промывают материал в воде и проводят мацерацию в смеси 96%-го раствора этилового спирта и концентрированной соляной кислоты (1:1) в течение 5—6 мин. После этого материал выдерживают для просветления в хлоралфеноле (10 г хлоралгидрата и 5 г
фенола растворяют в 100 мл воды) в течение 5 мин. Окрашивают листочки в ацетокармине, в котором материал находится до суток. Давленые препараты готовят обычным способом.
Для подсчета числа хромосом в корешках свеклы семена проращивают на влажной фильтровальной бумаге в чашках Коха при температуре .30 °С в течение двух-трех суток. По достижении корнями длины 5—8 мм семена переносят в холодильник с температурой 4°С на 3 ч или на ночь. Корни длиной 8—13 мм фиксируют.
Порядок работы по методике ТСХА следующий.
1. Фиксация этиолированных листочков длиной 2—4 мм в период, когда растение имеет 2—3 пары листьев. В качестве фиксатора используют уксусный алкоголь (3:1). Продолжительность фиксации 12—24 ч.
2. Промывание в 70%-м растворе этилового спирта два раза.
3. Окрашивание ацетокармином.. Перед окраской на 10 см3 кармина необходимо добавить 1 см3 насыщенного раствора FeClz- В тигли с листочками наливают 0,5—0,7 мл кармина, нагревают до кипения, накрывают тигли пленкой и, держат при 15—18°С. Затем листочки переносят в 1%-й раствор ацетоорсеина и слегка подогревают.
4. Приготовление давленого препарата в капле 40%-го хлоралгидрата.
Для морфометрического анализа хромосом клубочки свеклы замачивают в воде около 7 ч и проращивают в термостате при 28—30°С. Когда корни достигнут 1—1,5 см, клубочки помещают на сетку с водой и еще доращиваю.т при той же температуре. Перед полуторачасовой обработкой ,парадихлорбензо-лом при 15°С корни разрезают лезвием вдоль на 7з от основания. Перед фиксацией в уксусном алкоголе их промывают водой. Экспозиция при фиксации — двое суток при 35 °С. Мацерацию осуществляют в 1 н. растворе НС1 при 60°С 4 мин, затем промывают материал в воде и окрашивают в 2%-м растворе ацетоорсеина в течение суток.
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 110 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed