Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Каждой ткани присущ определенный уровень митотической активности, изменение которого носит четко выраженный ритмический характер. Выявлена суточная и сезонная периодичность числа митозов. В экспериментальной работе нередко приходится учитывать, в какое время суток наблюдается максимальное число митозов в изучаемой ткани. У многих растений максимум митозов отмечается ночью, а минимум — днем. Исследования, проведенные на ячмене в естественных условиях, показали, что максимальное число митозов наблюдается в 18ч, а минимальное—в 6 ч утра, причем в корневых и стеблевых меристемах максимальное и минимальное число митозов происходит в одно время.
МИТОТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ТКАНИ
И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОТДЕЛЬНЫХ
ПЕРИОДОВ И ФАЗ МИТОТИЧЕСКОГО ЦИКЛА
При изучении деления клеток нередко приходится определять митотическую активность ткани, т. е. отношение числа клеток, находящихся в митозе, к общему числу клеток исследуемой
ткани. Его можно выразить через показатель, который называется митотическим индексом.
Определение митотического индекса. Его устанавливают двумя способами. Первый из них заключается в следующем. На постоянных препаратах с определенного среза изготавливают рисунок. На нем отмечают и подсчитывают все клетки, находящиеся в митозе. Контуры рисунка переводят иа стандартную бумагу. Рисунок вырезают и взвешивают на торзионных весах. Зная массу 1 см"2 бумаги, можно определить площадь среза изучаемой ткани. Митотический индекс в этом случае определяют как число митозов на единицу площади ткани.
Чаще митотический индекс выражают в промилле, т. е. числе митозов на тысячу клеток ткани. Для этого на постоянных препаратах подсчитывают число митозов в определенном количестве срезов. Отдельно учитывают общее число клеток на этих же срезах.
Определяют отношение среднего числа митозов к среднему числу клеток в одном срезе и умножают на 1000. В результате такого вычисления митотический индекс (MI) выражают в промилле (%о) и определяют по формуле
mi- ...i!LtJL±A + т)_ юоо
И+П+М+А+Т
где Я—'число клеток в профазе, М — в метафазе, А — в анафазе, Т — в те-лофазс, И — в интерфазе.
Для определения митотического индекса пригодны не только микротомные срезы, но и давленые препараты. В последнем случае кончик корня растения с зоной деления клеток после фиксации, мацерации и окраски накрывают покровным стеклом, раздавливают иа предметном стекле так, чтобы клетки расположились в один слой, и рассматривают под микроскопом с большим увеличением.
Относительную длительность каждой фазы митоза (%) определяют по другой формуле! Для профазы она выглядит следующим образом:
гг Л- 100
П + М + А + т'
До проведения подсчетов нужно научиться отличать клетки, находящиеся в разных фазах митоза, от иеделящихся и клетки зоны деления от клеток других зон по форме и величине.
Номер поля Число клеток в
профазе (Я) метафазе (М) анафазе (Л) телофазе (T) интерфазе (Я)
•
Определение продолжительности отдельных периодов митотического цикла. Иногда невозможно прижизненно определить продолжительность митоза и интерфазы. Обычно в таких случаях объекты облучают или обрабатывают колхицином. Радиация подавляет митозы. Определяя время, за которое исчезнут все делящиеся клетки, можно установить продолжительность митоза. Обрабатывая объект колхицином, останавливают митозы в период метафазы. Число остановленных митозов (М/кх) пропорционально митотическому индексу (MI) и времени действия колхицина (А) и обратно пропорционально продолжительности митоза (/м):
лаг МГА j АН А
М/кх =--, отсюда
Ml кх
Колхициновый метод может давать завышенные результаты при определении продолжительности митоза, поэтому в каждом конкретном случае нужно выбирать тот или иной метод.
Продолжительность интерфазы можно определить исходя из длительности митоза и общего числа клеток в ткани. Установлено, что отношение числа митозов (л) к числу неделя-щихся клеток {N) равно отношению продолжительности митоза (/м) к продолжительности интерфазы (Г): п tM ™ tMN
= —, отсюда Т NT п
В цитологической практике очень распространен следующий простой способ определения продолжительности митотического цикла. Рассмотрим его на примере скерды зеленой. Проросшие семена с корнями длиной 2—3 мм, т. е. в период, когда в них идут митозы, помещают в чашки Петри с 0,01 %-м раствором колхицина и ставят в термостат при температуре 25 °С. Через каждые 2 ч корни фиксируют в уксусном алкоголе и на давленых ацетокарминовых препаратах отмечают появление тетраплоидных клеток. Удобно устанавливать тетраплоид-ность по метафазе. Если тетраплоидные метафазы наблюдаются спустя 8—12 ч, то и продолжительность митотического цикла составляет 8—12 ч.
