Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Для окраски мицелия и гаусторий можно применять метод Кобеля. Готовят раствор из 0,1 г анилиновой синей, 50 мл молочной кислоты, 100 мл дистиллированной воды. Ткань обрабатывают этим раствором 5 мин, можно при подогреве, промывают и дифференцируют молочной ки.слотой также с подогревом.
Из других красителей в работе с грибами используют ген-циановый фиолетовый и метиленовую синюю.
Материал фиксируют неразведенным этиловым спиртом, фиксатором Карнуа, ацетоформолом (100 мл 50%-го раствора этилового спирта, 7 мл формалина, 7 мл ледяной уксусной кислоты) и др. После фиксации его промывают 96%-м раствором спирта и хранят в крепком спирте.
Чтобы зафиксировать материал в культуре, прикладывают покровное стекло к колонии клеток, а затем погружают его в фиксатор, промывают и окрашивают.
Если имеется взвесь спор, то небольшую порцию из нее капилляром помещают в 1—2 капли фиксатора на предметное стекло на несколько минут или дольше, накрывают покровным стеклом. Затем промывают и окрашивают путем протягивания жидкости под покровным стеклом при помощи фильтровальной бумаги. Септориоз злаков можно исследовать по методу Манжэна. Для этого кусочек листа фиксируют в абсолютном этиловом спирте
и затем окрашивают 1%-м раствором анилинового синего в молочной кислоте. После промывки объект смотрят в капле молочной кислоты.
Для выявления прорастающих спор на листе можно использовать фиксатор из 9 ч. 95%-ного раствора этилового спирта и 1 ч. уксусной кислоты (при кипячении). Затем объект переносят в раствор хлопчатобумажного синего (в воде или молочной кислоте) .
Метод Стоутона. В 5%-м растворе фенола в дистиллированной воде растворяют 0,1 г тионина. Окрашивают в нем объект в течение 1 ч, затем обезвоживают в серии спиртов и подкрашивают оранжем G в абсолютном спирте. После промывки препарата в 100%-м спирте проводят его через ксилол и заключают в бальзам. Гифы грибов окрашиваются в фиолетово-пурпуровый цвет, а ядра становятся пурпурными. Клетчатка окрашивается в желто-зеленый цвет, ядра растительных клеток — в голубой.
Сохранить фиксированный материал можно в смеси спирта, глицерина и воды (1:1:1) по Кальберлу.
При использовании гербариого материала необходимо до приготовления препаратов размягчить объект путем кипячения в воде или слабом растворе спирта, молочной кислоте и др.
ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ БАКТЕРИЙ И ВИРУСОВ
Бактерии — одноклеточные организмы, прокариоты. Длина палочковидных бактерий 1 —10 мкм, а диаметр кокков 0,2 мкм. У бактерии различают клеточную стенку, которая может быть окружена капсулой, цитоплазму, нуклеоид (рис. 44). Опорным каркасом клеточной стенки служит гликопротеид муреии. Клеточную стенку отделяет от цитоплазмы цитоплазматическая мембрана, содержащая дыхательную цепь.
В цитоплазме бактерий не обнаружены эндоплазматическая сеть и митохондрии, но имеются рибосомы 70S. У гетеротрофных бактерий есть мезосомы — мембранные структуры — производные цитоплазматической мембраны. Нуклеоид в отличие от ядра высших организмов не окружен ядерной мембраной и не содержит ядрышка, он может быть разветвленной формы, имеет одну хромосому, состоящую из кольцевой ДНК, не связанной с гисто-нами. У бактерий обнаружены дополнительные генетические элементы, содержащие ДНК в виде плазмид, которые могут быть автономны в цитоплазме или включены в хромосомы. Эта особенность плазмид используется в генной инженерии.
Размножаются бактерии путем простого деления пополам без - образования веретена деления. У бактерий открыт и половой процесс в виде конъюгации, в которую вступают бактерии с разны-
Рис. 44. Бактерия Escherihia coli.
ми половыми факторами (например, F~ и F+). Между конъюгирующими особями образуется тонкий цитоплазматический мостик, по которому от одной бактерии — донора к другой — реципиенту переходит часть ДНК. В результате образуется неполная зигота, называемая мерозиготой.
Вирусы по размеру не крупнее некоторых макромолекул, например диаметр вируса ящура 10 нм, вируса оспы 250 нм. В составе вирусов выявлены нуклеиновые кислоты (ДНК, у растений чаще РНК) и белки. По морфологии их делят на палочковидные (например, РНК-содержащий вирус табачной мозаики и Х-вирус картофеля) и сферические (вирусы оспы, гриппа, ящура, полиомиелита).
Бактериофагами называют вирусы бактерий. Многие из них имеют сферическую форму с отростками (рис. 45). Головка фага, как и других вирусов, представляет собой белковый чехол, под которым находится нуклеиновая кислота. Фаг прикрепляется к бактерии концом отростка, лизирует клеточную стенку и впрыскивает внутрь клетки нуклеиновую кислоту. Размножаются вирусы внутри живой клетки-хозяина, используя его ферменты.
Умеренные бактериофаги могут находиться в длительной взаимосвязи с бактериями. Это явление названо лизогенией. В лизогенных клетках генетическая информация фага сохраняется в виде профага, который встраивается в хромосому бактерии,
Рис. 45. Фаг № 1 с головкой и отростком. По А, С. Тихоненко.
В интеграции фага и бактерии участвует фермент, детерминируем мый фагом. Профаг может придавать бактерии новые свойства. Это явление названо конверсией.
