Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Паушева З.П. -> "Практикум по цитологии растений " -> 45

Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.

Паушева З.П. Практикум по цитологии растений — М.: Агропромиздат, 1988. — 271 c.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка): praktiumpocitologii1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 110 >> Следующая

зуют хлор-цинк-йод, который готовят за несколько дней до проведения определения и хранят в темноте. По Новопокровскому, 20 г хлорида цинка растворяют в 8,5 мл воды при подогревании и получают раствор 1. Затем берут 1,5 г кристаллического йода и 3 г йодида калия и растворяют в 60 мл воды — раствор 2. В раствор 1 добавляют раствор 2 по каплям (около 1,5 мл), встряхивая и следя за появлением осадка.
Перед определением объект смачивают водой, а затем ее удаляют фильтровальной бумагой. После этого наносят каплю хлор-цинк-йода и следят под микроскопом за появлением лиловой окраски.
Определение ка л лозы. Этот полисахарид представляет собой бесцветное аморфное вещество, нерастворимое в холодной воде и спирте, но легко растворяющееся в крепких соляной п серной кислотах, в 1%-х растворах гидроксидов натрия или калия. Каллоза выявляется в оболочках микроспороцитов и тетрад микроспор в 5—10%-м растворе сахарозы прижизненно, так как отличается от сахарозы показателем преломления. Хлор-цинк-йод окрашивает каллозу в кирпично-красный цвет. Можно приготовить 0,25%-й раствор анилинового синего в 0,15 М растворе К2НРО4 (pH 8,2). По И. Д. Романову, в каплю такого раствора помещают содержимое пыльника и добавляют каплю 5—• 10%-ного раствора сахарозы.
Под микроскопом с осветителем ОИ-18 и светофильтром УСФ-6 наблюдают желто-зеленую флуоресценцию каллозы.
Белки
Белки содержатся в 'составе цитоплазмы, ядра и различных органоидов.
Биуретовая реакция. Она основана на выявлении пептидных связей, наиболее характерных для белков.
В щелочной среде белки и полипептиды дают окрашенные соединения с ионом меди (розовая, фиолетовая окраска). Необходимые реактивы: 7%-й раствор медного купороса (Jf), 33%-й или 50%-й раствор NaOH или КОН (2), 5%-й раствор трихлор-уксусной кислоты (3). Реакция малочувствительна для небольших количеств белков.
Объекты помещают на 5 мин И/ более в раствор 1 в часовом стекле, отсасывают раствор. Затем промывают объекты в воде и переносят их на предметное стекло в каплю раствора 2 на 10— 60 мин до выявления окраски. Поскольку окрашивание может возникнуть не только в присутствии белков, но и в присутствии таких аминокислот, как аспарагин и гистидин, необходимо предварительно обработать материал трихлоруксусной кислотой, т. е. удалить аминокислоты. Хорошие результаты реакция дает на меристемах (на примере зародыша).
Фиксация спиртом непригодна для приготовления материала из плодов злаков, содержащих спирторастворимые белки.
Определение основных белков (см. с. 94).
Реакция на суммарные белки с использованием б р о м ф е н о л о в о г о синего. Эта реакция очень чувствительная, ее можно использовать для количественных определений в цитофотометрии. Однако интенсивное окрашивание белков бромфеноловым синим происходит только в присутствии сулемы.
Аминокислоты
Как известно, из аминокислот построены белки. Таким образом, все живые клетки содержат белки, а следовательно, и аминокислоты. Растения способны синтезировать все известные аминокислоты.
Нингидриновая реакция. Необходимые реактивы:
0,5—1%-й водный раствор нингидрина (7); 5%-п раствор три-хлоруксусной кислоты (2).
Свежий или зафиксированный спиртом либо 10%-м раствором формалина материал помещают в раствор 1 на предметное или часовое стекло, подогревают до появления синей окраски. Окраска свидетельствует о присутствии аминогрупп.
Обычно эту реакцию ставят в двух вариантах с предобработкой материала трихлоруксусиой кислотой в течение 10—15 мин и последующей промывкой водой и без предобработки. Сохранение окраски объекта после обработки кислотой указывает на выявление аминогрупп белка. Реакция без.предобработки выявляет все аминогруппы как белка, так и свободных аминокислот. Окрашенное соединение возникает после присоединения азота аминокислоты к нингидрину.
Жиры
Жиры представляют собой глицериновые эфиры жирных кислот. Эти соединения легко растворимы в эфире, ацетоне, слаборастворимы в спирте, нерастворимы в уксусной кислоте. Содержатся жиры в семеиах подсолнечника, льна, конопли и других растений, а также в пыльце. В пластидах семян масличных культур происходит как синтез жиров из углеводов, так и обратный процесс. Масла семян растений — это смесь различных жиров, среди которых могут быть специфические жирные кислоты.
Для определения жиров обычно используют1 Судан III, который окрашивает также смолы, воск, кутин, суберин. Эта реакция неспецифична. Жидкие и твердые жиры выявляются через неодинаковое время. Быстрее — жидкие жиры.
Готовят раствор: 0,01 г Судана III разводят в 6 мл 96%-го раствора этилового спирта и добавляют 5 мл глицерина. Используют и более крепкие концентрации Судана III (0,1 г в 20 мл 70—90%-го раствора спирта). Свежий или фиксированный объект, по Левитскому, помещают в раствор судана III. О нали* чии жиров свидетельствует появление через несколько минут ярко-оранжевой окраски.
Нуклеиновые кислоты
Специфичны для ДНК реакция Фёльгена (см. с. 91) и окрашивание галлоцианинхромовыми квасцами после обработки ферментом РНК-азой (см. с. 92). Для выявления РНК можно использовать галлоцианиихромовые квасцы после обработки ферментом ДНК-азой. Эти реакции применяют не только для визуальных наблюдений под микроскопом, но и для количественного определения нуклеиновых кислот при цитофотометрии. ДНК и РНК выявляют также метиловым зеленым и пиронином по Бра-ше (см. с. 93).
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 110 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed