Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Многие лаборатории применяют для превращения давленых препаратов в постоянные метод с жидким азотом. Для этого в сосуды с жидким азотом вставляют алюминиевый стержень, имеющий небольшой столик. Столик быстро охлаждается, и на его поверхность кладут препараты. В дальнейшем, так же как это было описано выше, отделяют покровное стекло, а предметное стекло проводят последовательно через серию жидкостей, затем препарат заключают в бальзам.
Если нет сухого льда и жидкого азота, для отделения покровных стекол можно воспользоваться более простой методикой. Для ацетокарминовых препаратов берут 10%-й раствор уксусной кислоты. Наливают ее в чашку Петри, кладут туда две спички и на них помещают препарат покровным стеклом вниз. Через 10—15 мин покровное стекло отделяется, Предметное стекло быстро опускают в фиксатор — уксусный алкоголь, а затем последовательно в абсолютный спирт, ксилол и заключают в бальзам. Этот метод применяют в различных модификациях.
После окрашивания препаратов по Фёльгену и отделения покровного стекла препарат обезвоживают последовательно в крепких спиртах и проводят через ксилол перед заключением в бальзам (см. с. 103).
Существует методика перевода временных препаратов в постоянные б.ез удаления покровного стекла путем пропускания с одной стороны покровного стекла и отсасывания с помощью фильтровальной бумаги с другой его стороны последовательно разных растворов: 45%-го раствора уксусной кислоты, смеси спирта и уксусной кислоты (1:2), абсолютного спирта. Можно также последовательно провести спирты разной концентрации, а затем ксилол и бальзам. Эту методику применяют в работе с ацетокарминовыми препаратами.
Наиболее просто можно заключить гистологические срезы в сахарный сироп по методике Шалумовича. Метод применяют в работе с ротаническими объектами, в том числе для флуоресцентной микроскопии. Растворяют 25 г сахара в 50 мл горячей воды и выпаривают до 3Д объема на водяной бане. После закипания раствора его фильтруют и добавляют кристаллик антисептика— тимола. Полученный сироп в различных модификациях используют для быстрого изготовления постоянных препаратов. К окрашенному объекту после удаления избытка красителя с помощью фильтровальной бумаги добавляют каплю сиропа сбоку покровного стекла или раздавливают объект в капле сиропа. Препарат исследуют сразу или подсушивают его до превращения в постоянный.
Для превращения временных давленых препаратов в постоянные в лабораторной практике можно использовать термоэлектрические охлаждающие столики — приспособления к замораживающему микротому (рис. 34). Они позво-
Рис. 34. Термоэлектрический охлаждающий столик (ТОС):
1 — рабочая охлаждающая поверхность; 2 — корпус; 3 — штуцер для подключения воды; 4 — клемма для подключения электрического тока.
ляют замораживать объект без угольной кислоты. ТОС состоит из охлаждающего столика и выпрямителя. Столик охлаждается вследствие того, что постоянный электрический ток, проходя через полупроводниковые элементы, вызывает охлаждение наружных слоев и нагревание внутренних. Чтобы не перегревались внутренние слои, через них пропускают проточную воду.
Для работы столик замораживающего микротома вынимают; из гнезда и иа его место вставляют ТОС. На штуцеры ТОС надевают резиновые шланги, один из которых соединяют с водопроводным краном, а другой опускают в раковину. Клеммы ТОС со знаком (-{-) соединяют с концами выпрямителя, заряженными положительно, а со знаком (—) —с заряженными отрицательно. После этого выпрямитель включают в электросеть.
Температура поверхности столика максимально снижается через 7—12 мин, замораживание срезов происходит за 3—4 мин. После охлаждения столика на его поверхность помещают временный препарат, предварительно подсушенный с боков покровного стекла фильтровальной бумагой для удаления избытка жидкости. Препарат после замораживания снимают и лезвием быстро удаляют с него покровное стекло. Предметное стекло с оставшимися клетками помещают в серию жидкостей: 96%-й раствор этилового спирта, абсолютный спирт и ксилол. Затем препарат заключают в канадский бальзам. По окончании работы выключают выпрямитель, а затем отключают воду.
ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ
Гистохимические и цитохимические методы исследований помогают выявлять определенные вещества в тканях и клетках и устанавливать их локализацию. Первые обычно применяют для изучения тканей, вторые — компонентов клетки.
Основоположником микроскопической химии является французский ботаник Ф. В. Распайль (1794—1878 гг.). Одна из первых реакций, получившая широкое распространение в ботанике, была йодная реакция и а крахмал.
Гистохимические реакции применяют как на живых, так и на фиксированных объектах с учетом того, чтобы фиксатор не вымывал изучаемые вещества. Для сравнительной оценки микроколичеств вещества используют либо шкалы с оценкой в баллах, либо, если применяются специфические красители, более точные методы цитофотометрии.
Наблюдения цветных реакций при изучении препаратов под микроскопом обычно сопровождают рисунками, на которых концентрацию вещества показывают точками, располагаемыми с различной плотностью. В качестве учебных объектов можно взять лист капусты (поперечные разрезы жилок) и зерновку кукурузы (продольные разрезы зародыша). Можно использовать пыльцу, пестики, эпидермис и другие объекты.
