Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Паушева З.П. -> "Практикум по цитологии растений " -> 42

Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.

Паушева З.П. Практикум по цитологии растений — М.: Агропромиздат, 1988. — 271 c.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка): praktiumpocitologii1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 110 >> Следующая

5—10 мин в каждом.
5. Промывают материал в проточной воде, а затем в 40— 45%-м растворе уксусной кислоты.
6. Готовят давленые препараты.
Переносить корни или пылинки из одной жидкости в другую удобно в небольших стеклянных цилиндрах без дна, затянутых с двух концов марлей.
После окрашивания реактивом Шиффа может возникнуть необходимость провести мацерацию растительных объектов. В этом случае, помимо уксусной кислоты, пользуются цитазой из зобной жидкости виноградных улиток.
Зобную жидкость извлекают из улиток Helix lucorum iaurica, убитых быстрым замораживанием. Очищают ее центрифугированием при 20 тыс. оборотов в минуту в течение 30 мин и хранят в замороженном состоянии при —4°С. Корни, окрашенные но Фёльгену, помещают сначала на фильтровальную бумагу, а затем в плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 мл. В пробирки добавляют цитазу по 0,05 мл на 10 корней (кормовых бобов). Мацерация длится 20 ч при комнатной температуре.
Окрашивание нигрозином. Используют следующую методику мацерации и окрашивания объектов. Готовят смесь концентрированной соляной кислоты и 95%-го раствора этилового спирта (соотношения 1:4, 1:2, 1 : 1, в зависимости от материала; для нежных объектов — 1 : 4). В мацерирующую жидкость
при 10—15°С помещают объекты на 5—20 мин. После промывки в охлажденной воде в течение 30—120 мин их переносят на предметное стекло в каплю 4%-ного раствора нигрозина при температуре 18—20 °С на 2—3 мин.
Приготовление красителя. Готовят нигрозин растворением в кипящей дистиллированной воде. Раствор кипятят 5—7 мин и фильтруют в темноте. Через 10—14 дней краситель готов.
Ускоренный метод приготовления давленых препаратов
Фиксируют материал по Дайеру в смеси этилового спирта, уксусной кислоты, хлороформа и формалина (10:2:2:1) в течение 5 мин.
Мацерацию проводят в растворе 1 н. НС1 при 60°С в течение нескольких минут в зависимости от объекта. Окрашивают объект
2—3 мин в смеси орсеина, молочной и пропионовой кислот. Для этого 2 г орсеина растворяют в 100 мл смеси, состоящей из равных частей молочной и пропионовой кислот, добавив до 45% воды.
Приготовление препаратов из стеблевой меристемы
У злаков корни трудно раздавливаются, а цитоплазма клеток нередко сильно окрашивается ацетокармином. В таких случаях изучение митозов и хромосом можно проводить на стеблевой меристеме.
Колеоптиле ,(до 1 см) проросшего семени твердой пшеницы обрабатывают по методике Маккья не менее 3 ч 0,3%-м раствором колхицина и насыщенным раствором парадихлорбензола. Фиксируют проростки в уксусном алкоголе (3 : 1). Затем материал проводят через серию растворов спирта (80, 50, 30%-й), промывают в воде и красят реактивом Шиффа (см. с. 101).
При изучении действия мутагенов на пшеницу в Институте химической физики АН СССР было предложено проводить исследования во время первых митозов в конусе нарастания стебля в фазе колеоптиле.
Порядок работы следующий. Зерновки пшеницы замачивают и ставят в термостат при 25 °С. Через 36—40 ч колеоптиле с щитком семени фиксируют в уксусном алкоголе в течение 12 ч. Материал хранят в 70%-м растворе спирта со следами цитрата железа. Окрашивают в ацетокармине. Материал можно оставлять на ночь в красителе или нагревать в нем в течение 5—6 мин до легкого вскипания. В 45%-м растворе уксусной кислоты отделяют конус нарастания и раздавливают его под покровным стеклом'. Метод используют для изучения хромосрмных перестроек в анафазе и митотической активности клеток под действием мутаген нов.
Фиксируют молодые листочки в фазе наиболее сильного роста. В качестве фиксатора используют уксусный алкоголь. Промывают и сохраняют материал в 70%-м растворе спирта. Для окрашивания листочки помещают в краситель (ацетокармин, ацетоорсе-ии или ацетолакмоид) и доводят до кипения несколько раз. Затем их переносят в 45%-й раствор уксусной кислоты па предметное стекло. От листочка отделяют основание, так как здесь чаще встречаются митозы, а остальную часть удаляют. Основание листочка разрезают на стекле, накрывают объект покровным стеклом и постукивают спичкой сверху. Метод используют в работе со злаками и картофелем. Можно обрабатывать листочки перед фиксацией 0,2%-м раствором колхицина в течение 1—2 ч.
Для изучения хромосом перед фиксацией молодые листочки помещают в насыщенный раствор эскулина на 15—24 ч при 10— 12°С, а затем фиксируют в уксусном алкоголе от 3 до 24 ч.
Для окраски и мацерации объекты помещают в смесь 2%-го раствора ацетоорсеина с 1 н. НС1 (9:1), подогревают на спиртовке 3—4 с и оставляют в смеси на 30 мин при 30°С. После этого объекты .переносят в 1%-й раствор ацетоорсеина на предметное стекло и раздавливают под покровным стеклом.
Перевод временных препаратов в постоянные
Существует несколько методов перевода временных препаратов в постоянные. Наиболее широко распространен метод с использованием твердой угольной -кислоты по Конжеру и Фер чай льду. Готовый давленый препарат кладут на ровную поверхность сухого льда на 1—1,5 мин. Покровное стекло становится неподвижным. Скальпелем или лезвием бритвы отделяют его от предметного. Клетки должны остаться на предметном стекле, которое затем последовательно выдерживают по 2—5 мин в 50, 70, 80, 96%-х растворах этилового спирта, абсолютном спирте и в ксилоле. При отсутствии 100%-го этилового спирта можно использовать бутиловый или изобутиловый спирт. Перед ксилолом иногда вводят смесь абсолютного этилового спирта и ксилола. После ксилола препарат заключают в канадский бальзам, используя чистое покровное стекло.
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 110 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed