Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Паушева З.П. -> "Практикум по цитологии растений " -> 41

Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.

Паушева З.П. Практикум по цитологии растений — М.: Агропромиздат, 1988. — 271 c.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка): praktiumpocitologii1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 110 >> Следующая

Готовые препараты можно окантовать расплавленным парафином или превратить в постоянные при помощи сухого льда или жидкого азота (см. с. 103). •
Пропионов о-г емато к сил и новый метод окрашивания по Henderson и Lu. Перед окрашиванием объект мацерируют в 1 н. растворе НС1 от нескольких до 30 мин, промывают водой и на несколько минут помещают в 50%-ный раствор пропиоиовой кислоты.
Приготовление красителя. Растворяют 4 г гематоксилина в 10 мл 96%-го раствора этилового спирта, затем добавляют дистиллированную воду до 100 мл. Раствор оставляют открытым при комнатной температуре для созревания на 2—3 мес. Для ускорения созревания сосуд с раствором красителя можно поставить в термостат при 30—35 °С иа сутки. Созревший раствор смешивают со 100 мл 50%-го раствора пропиоиовой кислоты. Допускается'смешение свежего раствора с пропиоиовой кислотой.
Отдельно готовят раствор железоаммоиийных квасцов в пропиоиовой кислоте. Для этого 1 г квасцов растворяют в 200 мл 50%-го раствора пропиоиовой кислоты.
Известны четыре способа окрашивания. Приведем два из них. Первый способ используют при наличии незрелого раствора кра-
сителя: последний смешивают с квасцами (1:1) и используют через сутки или более. При втором способе к 1—2 каплям созревшего красителя добавляют квасцы (1 : 1) и помещают в эту смесь объект на предметное стекло.
Добавление насыщенного раствора ацетата железа в 50%-м растворе пропионовой кислоты способствует усилению окрашивания. Метод применялся для изучения хромосом льна, но используется и в работе с другими объектами.
Окрашивание ацетофуксином. Окрашивают объекты в ацетофуксине в закрытых бюксах в течение 1—3 ч. Давленый препарат готовят в 30%-й уксусной кислоте, которая способствует обесцвечиванию цитоплазмы. Хромосомы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет.
Приготовление красителя. Растворяют 1 г основного фуксина в 50 мл 40%-го раствора уксусной кислоты. Раствор подогревают до 50°С для хорошего растворения фуксина, затем охлаждают до 25—30 °С и фильтруют. Объекты фиксируют в 45%-м растворе уксусной кислоты 10—30 мин при 15 °С. Затем помещают в горячий 1 н. раствор HCI на 15—30 с при 60°С.
Пропионов о-л а к мо и дный метод окрашивания по Каптарю. Кончики корней длиной 2—4 мм помещают в пробирку с 5—10 каплями стандартного раствора на 1—2 ч. Затем корни переносят в 0,5 мл 40%-ного раствора пропионовой кислоты, которую доводят до кипения в течение не более 5—30 с для мацерации объекта. После кипения корни переносят на предметное стекло в каплю 40%-го раствора пропионовой кислоты, накрывают покровным стеклом и давят на него. Подсчитывать хромосомы удобнее в корне не в зоне интенсивного деления, а в тех клетках, которые делятся тангентально и поэтому более удобны для подсчета. Они располагаются обычно по периферии препарата.
Приготовление красителя. Для окрашивания временных препаратов с корнями или пыльниками растений готовят смесь такого состава: 5 г лакмоида добавляют к 50 мл 50%-го раствора пропионовой кислоты. Полученный раствор ставят в темное место на 3—5 сут и время от времени встряхивают. Затем его фильтруют и используют в работе как стандартный раствор. Отдельно готовят 40%-й раствор пропионовой кислоты.
Хромосомы окрашиваются при таком способе в коричневый цвет. Контрастность хромосом увеличивается спустя полчаса после приготовления препарата.
Окрашивание реактивом Шиффа. Известны две модификации реакции Фёльгена для выявления ДНК: с холодным и горячим гидролизом объектов в соляной кислоте.
Приготовление красителя. При холодном гидролизе реактив Шиффа составляют из 97,5 мл дистиллированной воды, 2,5 мл концентрированной соляной кислоты, 0,5 г фуксина основного для фуксииосернистой кислоты, 1,5 г мс-тадисульфита калия (K2S2O5) или натрия (Na2S205). Составные части вносят
в сосуд в указанном порядке без взбалтывания. Закрытый сосуд с реактивом помещают в темное место па двое суток для обесцвечивания раствора.
Подлежащий окраске материал из фиксатора или 70%-го раствора спирта переносят в I н. раствор НС1, а затем в разбавленную соляную кислоту (1 ч. концентрированной HCl-f- 1 ч. дистиллированной воды) при комнатной температуре. Время гидролиза корней в HCI от 20 мин (для гороха) до 2 ч (для картофеля!. В реактиве Шиффа корни держат 15 мин и более. Потом их переносят в 45%-й раствор уксусной кислоты. Готовят препарат в той же концентрации уксусной кислоты.
При горячем гидролизе реактив Шиффа готовят по методу, указанному на странице 91. Порядок работы при этом способе следующий.
1. Материал из 70%-го раствора спирта сначала переносят на несколько секунд в холодный раствор 1 н. НС1, затем на несколько минут в раствор 1 н. ИС1 с температурой 60°С для горячего гидролиза (6—8 мин — для фиксатора Кариуа или уксусного алкоголя).
2. Снова переносят материал в холодный 1 п. раствор НО на несколько секунд.
3. Переносят материал в реактив Шиффа на 0,5—1,5 ч (время устанавливают опытным путем).
4. Промывают материал в трех сосудах с сернистой водой по
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 110 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed