Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
На правой стороне препарата наклеивают этикетку с указанием названия препарата, например: «Двойное оплодотворение мягкой пшеницы». Дробью указывают отмеченный срез на препарате. Например, 2/г, т. е. второй срез во втором ряду. Иногда срезы отмечают тушью с нижней стороны препарата. Готовые препараты хранят в специальных коробках.
ПОСТОЯННЫЕ ГЛИЦЕРИНОЖЕЛАТИНОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ
Для анатомических исследований в тех случаях, когда возникает необходимость быстро приготовить постоянный препарат, например с пыльцевыми зернами или прорастающими пыльцевыми трубками в пестиках пшеницы, ржи или других растений, объекты можно заключить в глицериножелатин.
Приготовление глицериножелатин а. Вносят 1 г желатина и 6 мл дистиллированной воды в небольшую колбу. Желатин набухает несколько часов. После этого в колбу добавляют 7 мл очищенного глицерина и кристаллик антисептика. Колбу ставят иа горячую водяную баню. Содержимое ее помешивают стеклянной палочкой. Через некоторое время смесь, в колбе разжижается. Ее переносят в термостат и фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде.
Глицериножелатин может долго храниться в закрытой склянке с корковой пробкой, в которую вставлена стеклянная палочка. При необходимости склянку с глицериножелатином помещают в воду, подогреваемую на водяной бане. Глицериножелатин .разжижается, и его используют для приготовления препаратов.
В качестве фиксирующей и просветляющей жидкости берут лактофенол Аммана. В его состав входят 1 ч. молочной кислоты, 1 ч. фенола, 2 ч. глицерина и 1 ч. воды. Красителем служит 1%-й раствор хлопчатобумажного синего, который добавляют в лактофенол.
Последовательность изготовления препаратов. Рыльце с проросшими пыльцевыми зернами помещают на предметное стекло, на которое наносят смесь лактофенола и красителя. Продолжительность одновременной фиксации и окраски 5—10 мин, затем пипеткой удаляют смесь и наносят чистый лактофенол для дифференцировки препарата. После окончательного удаления лактофенола наносят по капле теплого глицериноже-латина на предметное и покровное стекла. Смонтированный препарат быстро застывает. Такие препараты сохраняются от одного года до нескольких лет.
При изготовлении глицериножелатиновых препаратов можно воспользоваться насыщенным раствором метилового зеленого в 50%-м растворе спирта или водным раствором основного фуксина (1 г на 10 мл воды). Любой из этих красителей прибавляют к горячему глицериножелатину (20 капель фуксина на 15 мл глицериножелатина). Пыльцу помещают в центр предметного стекла и для просветления ее прибавляют 6—8 капель спирта для энтомофильных растений и 1—2 капли — для анемофиль-ных. Затем добавляют каплю горячего глицериножелатина с красителем и помешивают пыльцу иглой. Чтобы среда быстро не застыла, стекло проносят над пламенем спиртовки.
В 1965 г. И. Д. Романов применил для изучения пыльцы картофеля следующую методику. Он окрасил сухую пыльцу из пыльников на предметном стекле 0,1 %-м спиртовым раствором основного фуксина, который затем отмывал 1-*-2%-м раствором соды. Влажную окрашенную пыльцу заключал в глицериножелатин.
Глицериножелатиновые препараты широко применяют в анатомических исследованиях, при которых срезы желательно оставить неокрашенными или не проводить через спирты. Окрашенные в глицериножелатине такие срезы быстро обесцвечиваются. В ряде случаев при использовании метиленовой синей, кристаллвиолета, фуксина и других красителей удается сохранить окраску.
Например, чтобы изготовить глицериножелатиновые препараты для наблюдения плазмодесм в порах клеточных стенок
у созревающих семян плодовых и во время выхода семян из покоя с использованием кристаллвиолета, Е. 3. Окнина и Е. Н. Барская в 1956 г. готовили следующие реактивы:
первый раствор Люголя, состоящий из 0,75 г йодида калия и 1 г металлического йода, растворенных в 100 мл воды; два раствора серной кислоты 10%-й и 5%-й; второй раствор Люголя, состоящий из 1,25 г йодида калия и
1 г металлического йода, растворенных в 100 мл 5%-го раствора серной кислоты;
краситель— 1%-й водный раствор кристаллвиолета, который по каплям приливают к двум-трем каплям 5%-го раствора серной кислоты, пока она не окрасится в темно-зеленый цвет;
закрепляющий раствор, состоящий из 30 мл глицерина, 2 г хлорида цинка, 0,2 г металлического йода и 80 мл воды со следами йодида калия.
Последовательность работы следующая.
1. Свежие срезы помещают в первый раствор Люголя на 5 мин.
2. Переносят срезы в 10%-й раствор серной кислоты на 5 мин, а затем во второй раствор Люголя на 5 мин.
3. Промывают срезы 5%-м раствором серной кислоты 3 раза,
до исчезновения желтой окраски. /
4. Переносят срезы в краситель на 15—20 мин до просветления его окраски, а затем в закрепляющий раствор.
5. Просматривают срезы в глицерине или глицериножела-тине.
ВРЕМЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ.
ПЕРЕВОД ИХ В ПОСТОЯННЫЕ
Фиксация, хранение и мацерация объектов
В микроскопической технике широко применяют временные давленые препараты, для изготовления которых не нужны сложная процедура обезвоживания, заключение в промежуточную жидкость, в парафин и получение микротомных срезов.
