Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
До измерения объекта определяют увеличение объектива микроскопа. Для этого на столик микроскопа помещают объект-микрометр, на тубус надевают винтовой окулярный микрометр и фокусируют на резкость изображения перекрестия и шкалы объект-микрометра. Биштрих устанавливают в начале или в конце шкалы. Берут некоторое число делений объекта-микрометра, например 25. Подводят перекрестие к первому штриху шкалы и снимают отсчет, затем подводят перекрестие к двадцать пятому штриху и снова делают отсчет.
Линейное увеличение объектива определяют по формуле
(9)
аЪ
где V — увеличение объектива; М—N — разность двух отсчетов; а — число делений объекта-микрометра; Ь — цепа деления объекта-микрометра.
Для измерения объекта на столик микроскопа помещают препарат, центр перекрестия совмещают с краем изображения объекта и делают отсчет. Затем перекрестие совмещают со вторым'краем объекта и снова делают отсчет.
Размеры объекта определяют по формуле
где С — длина или ширина объекта, мм; V — увеличение объектива; М—N — разность отсчетов.
Во время выполнения работы необходимо, установив на столе микроскоп «Виолам Р» или МБР-3, добиться рационального освещения препарата по Келеру, подобрав необходимые светофильтры. Далее, воспользовавшись измерительным окуляром и объектом-микрометром, провести определение цены деления окуляра-микрометра и записать результаты в таблицу:
Марка и Номер Увеличе Число делений Цена деле
объекта- окуляра-
микрометра микрометра
(А) (Б)
Затем провести определение диаметра пыльцевых зерен у разных сельскохозяйственных культур и записать результаты в следующую таблицу:
Номер Название Увеличение Диаметр Цена деле Диаметр
измерения рода н вида микроскопа пыльцевых ния окуляра- пыльцевого
растения зерен в де микрометра, зерна, мкм
лениях оку мкм
ляра-микро
метра
Подсчет клеток в счетных камерах
Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло с углублением в центре в виде прямоугольника. На дне углубления нанесена сетка из 400 квадратов общей площадью 1 мм2, а площадь одного малого квадрата Уш мм2, большого—Узе мм2. Глубина камеры 0,1 мм, один малый квадрат с учетом этой глубины ограничивают объем Ушю мм3, или У4 ООО ООО мл, поскольку 1 мл=1000 мм3.
Каплю суспензии с клетками помещают в центр камеры, накрывают покровным стеклом, тщательно притирая его по краям камеры до появления ньютоновых колец. Подсчет начинают через 3—5 мин, после того как клетки осели. Клетки считают в 10 больших или в 20 малых квадратах, перемещая их по диагонали. Число клеток в 1 мл суспензии (М) определяют по формуле
а • ЮООп
М =----------,
hs
где а —среднее число клеток в квадрате сетки; h — глубина камеры, мм; s — площадь квадрата сетки, мм2; 1000—коэффициент перевода см3 в мм3; л — разведение.
Если в одном квадрате пять клеток и не было разведения, то в 1 мл суспензии находится
М = = 20 000 000 клеток.
0V lx 1/400
Для проверки подсчеты повторяют 3—4 раза на новых пробах. Если суспензию нужно развести, то 1 мл ее сначала помещают в пробирку, в которой налито 9 мл дистиллированной воды. Это будет разведение 1: 10. После перемешивания этой смеси из нее берут 1 мл и вносят в другую пробирку с 9 мл воды. Это будет разведение 1 : 100, из этой смеси аналогичным образом можно приготовить разведение 1:1000 и т. д.
3 3. П. Паушева
33
Микрофотография
Регистрация изображения препарата с использованием микрофотографии получает все большее распространение, хотя она не всегда может заменить собой рисунок.
Для микрофотографии необходимо следующее оборудование: микрофотонасадочная камера, микрофотонасадка, или микрофотоустановка, биологический
микроскоп, осветитель со светофильтрами.
На рисунке 17 показана микрофотонасадка МФН-12 с пленочной фотокамерой, используемая с «Биолам Р» и МБР-3. Она снабжена окулярами 7х и 10Х, вертикальным тубусом и светофильтрами. В корпусе МФН-12 размещена светоделительная призма, которая делит световой поток, выходящий из окуляра, на два пучка. Один из них она направляет на фотопленку (60% света), а другой — в глаз наблюдателя. Для контроля резкости изображения на фотоэмульсионном слое пользуются визирной трубкой. В ней имеются окуляр, объектив и сетка (или матовое стекло), которая представляет собой стеклянную пластинку с прямоугольной рамкой. В центре рамки помещено перекрестие (или биштрихи).
