Искусственные генетические системы. Том 1 - Патрушев Л.И.
Скачать (прямая ссылка):
4.1.1. Клонотеки геномной ДНК ...................... 157
4.1.2. Клонотеки кДНК .............................. 158
4.1.3. Случайные и упорядоченные клонотеки ......... 160
4.2. Поиск последовательностей в клонотеках генов ...... 162
4.2.1. Использование меченых зондов ................ 163
4.2.2. Повторный скрининг........................... 167
4.2.3. Субклонирование ............................. 167
Глава 5. Системы экспрессии рекомбинантных генов............. 168
5.1. Экспрессирующие системы микроорганизмов ........... 168
5.1.1. Грамотрицательные бактерии .................. 168
5.1.2. Клетки дрожжей как экспрессирующие системы ............................................... 171
5.2. Системы экспрессии, основанные на культуре клеток
животных............................................ 174
5.2.1. Клетки яичников китайских хомячков (линия
СНО)........................................... 176
5.2.2. Клетки мышиной миеломы (линия SP2/0)......... 178
5.2.3. Клетки селезенки мышей (линия MEL) .......... 179
5.2.4. Клетки африканской зеленой мартышки (линия
COS)........................................... 180
5.2.5. Клетки насекомых, зараженных бакуловиру-
сами .......................................... 181
5.2.6. Сравнение эффективности рассмотренных систем
экспрессии..................................... 183
5.3. Клетки с нарушенной проницаемостью внешних мембран .......................................... 184
5.4. Бесклеточные белоксинтезирующие системы ........... 185
5.4.1. Прокариотические системы .................... 186
5.4.2. Эукариотические системы...................... 189
5.4.3. Проточные системы ........................... 190
Глава 6. Полимеразная цепная реакция и другие способы амплификации ДНК и сигналов .......................................
6.1. Проведение ПЦР......................................
6.1.1. Общая схема ПЦР..............................
6.1.2. Критические компоненты реакции...............
6.1.3. Конструирование праймеров....................
6.1.4. Термостабильные ДНК-зависимые ДНК-полиме-
разы...........................................
6.1.5. Другие критические компоненты и параметры
ПЦР ...........................................
6.2. Проблемы, возникающие при постановке ПЦР ...........
6.2.1. Появление неспецифических продуктов ПЦР......
6.2.2. Низкий выход или полное отсутствие продуктов
ПЦР ...........................................
6.3. Методы ПЦР .........................................
6.3.1. Стандартная ПЦР..............................
6.3.2. Множественная ПЦР............................
6.3.3. Асимметричная ПЦР............................
6.3.4. Гнездовая ПЦР ...............................
6.3.5. ПЦР с “горячим стартом”......................
6.3.6. ПЦР, сопряженная с обратной транскрипцией....
6.3.7. Амплификация больших участков ДНК с высокой
точностью .....................................
6.3.8. ПЦР in situ .................................
6.3.9. Аллель-специфическая ПЦР.....................
6.3.10. ПЦР, чувствительная к метилированию матрицы ...
6.3.11. Иммуно-ПЦР...................................
6.3.12. Количественная ПЦР (ПЦР в реальном времени) ..............................................
6.4. Амплификация последовательностей с неизвестной
первичной структурой ................................
6.4.1. Использование ПЦР для продвижения вдоль ДНК
от участка с известной первичной структурой в сторону неизвестной последовательности.........
6.4.2. Понижение сложности амплифицируемой ДНК с
помощью ПЦР (метод RAPD).......................
6.5. Одновременная амплификация последовательностей
целого генома .......................................
6.6. Альтернативные способы амплификации нуклеиновых
кислот in vitro......................................
6.6.1. Лигазная цепная реакция .....................
6.6.2. Изотермические системы амплификации нуклеиновых кислот, основанные на транскрипции ...........
6.6.3. Амплификация по типу катящегося кольца.......
Заключение. Стратегия выделения нового гена...................
Литература ...................................................
192
192
192
194
195
198
201
203
203
206
207
207
207
207
208 208 211
212
213
214 218 220
223
233
233
237
239
241
241
243
250
251 254
Часть II
БЕЛКОВАЯ ИНЖЕНЕРИЯ
