Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Патрушев Л.И. -> "Искусственные генетические системы. Том 1" -> 172

Искусственные генетические системы. Том 1 - Патрушев Л.И.

Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы. Том 1 — М.: Наука, 2004. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): iskusstvenniegeneticheskie2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 166 167 168 169 170 171 < 172 > 173 174 175 176 177 178 .. 221 >> Следующая

Оригинальный, высокоэффективный метод получения димерных и тримерных миниантител с несколькими специфичностями был недавно разработан группой С.М. Деева (Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, РАН) [231]. В этой работе авторы использовали свойство секретируемой рибонуклеазы (барназы) Bacillus amyloliquefaciens образовывать очень прочный комплекс (KD ~10-14 М) со своим белковым ингибитором барстаром. Благодаря небольшим размерам (длина полипептидных цепей барназы и барстара составляет 110 и 89 а.о., соответственно), их можно легко объединять стандартными генно-инженерными методами в одной полипептидной цепи с scFv-фрагментами антител, нарабатывать в большом количестве в бактериальных клетках и после очистки таких гибридных белков соединять друг с другом в разных комбинациях через образование комплекса барназа-бар-стар. Введение в гибридную полипептидную цепь тандемно двух молекул барназы позволяет присоединять к ней две гибридные молекулы миниантител, содержащих в своем составе молекулу барстара, что может приводить к созданию трехвалентных миниантител, в том числе и обладающих тройной специфичностью. Благодаря простоте и высокой эффективности данный элегантный метод может найти в будущем большое применение в разных областях молекулярной биологии и медицины, хотя пока не ясно, какова иммуногенность комплекса барназа-барстар для организма человека.
Димерные миниантитела двойной специфичности и scFv-ди-меры также обладают и двумя существенными преимуществами перед аналогичными полноразмерными антителами. Поскольку у них отсутствуют Fc-домены, то обладая соответствующими специфичностями, они способны лишь активировать Т-клетки после их сближения с клетками-мишенями, но не повреждать их через систему комплемента (подробнее см. ниже). По тем же причинам, а также вследствие их малого размера эти молекулы обладают значительно меньшей иммуногенностью.
Молекулярные мишени эффекторных и атакуемых клеток для антител двойной специфичности. Наиболее изученными рецепторами, активирующими цитотоксическое действие эффекторных клеток, являются Т-клеточные рецепторы (TCR) и рецепторы Fcy (FCyR). Все зрелые Т-лимфоциты экспрессируют на своей поверхности TCR, которые могут быть универсальными мишенями для bsAb, одна из специфичностей которых направлена против константных участков полипептидных цепей TCR-комплекса, например, CD3. Однако ответ лимфоцитов на взаимодействие TCR с антителами зависит от стадии дифферен-цировки данных клеток. Например, исходные С08+-Т-лимфоци-ты не способны лизировать клетки-мишени и для приобретения ими этой способности необходимо, чтобы активация TCR происходила одновременно с воздействием на них интерлейкина 2. В отсутствие цитокинов стимуляция TCR индуцирует апоптоз, что завершается гибелью Т-клеток [232]. Такого рода эффекты являются серьезным затруднением на пути направленного использования цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL) против опухолевых клеток in vivo.
Специфичные в отношении TCR bsAb могут быть использованы и для активации СБ4+-Т-хелперов, хотя и в этом случае, так же как и в случае CD8+-CTL, последствия стимуляции TCR зависят от присутствия цитокинов. В такой ситуации цитокины воспаления вызывают дифференцировку С04+-Т-клеток с образованием клеток Thl, тогда как цитокины IL-4 и IL-10 приводят к образованию клеток Th2. Какой тип клеток предпочтительнее, будет зависеть от вида и локализации опухоли, против которой предполагается их использовать. Все это указывает на то, что использование bsAb для лечения онкологических заболеваний в большой степени зависит от одновременного грамотного применения цитокинов и наверняка требует учета других факторов, которые еще предстоит обнаружить и исследовать.
Положительный эффект от применения bsAb можно получить и в случае их направленности против каждого из четырех
FcR, экспрессирующихся на поверхности лейкоцитов человека: Fc^RI (CD64), FCyRII (CD32), Fc^III (CD16) и FcaRI (CD89) [233, 234]. В этом случае использование bsAb вместо обычных mAb, прямо направленных против антигенов опухолевых клеток, дает преимущество, поскольку IgG другой специфичности, присутствующие в кровотоке в высокой концентрации, препятствует взаимодействию комплекса опухолевых клеток и IgG с рецепторами FCyR на поверхности эффекторных клеток. Антитела двойной специфичности, обладающие более высоким сродством к FCyR или взаимодействующие с эпитопами, локализованными вне сайта связывания Fc-домена антител, позволяют избегать ингибирующего влияния эндогенных IgG. Большинство клеточных медиаторов врожденного иммунитета (нормальные киллеры, моноциты, макрофаги и гранулоциты), в которых bsAb стимулируют ци-тотоксическое действие, фагоцитоз и воспалительные реакции, экспрессируют на своей поверхности FcR. Для этих клеток характерны тенденции к существованию в конститутивно активированном состоянии, что требует меньшей костимуляции цитокина-ми по сравнению с покоящимися Т-клетками для проявления ци-тотоксического эффекта после заякоривания с помощью bsAb на поверхности клеток-мишеней как in vivo, так и in vitro.
Предыдущая << 1 .. 166 167 168 169 170 171 < 172 > 173 174 175 176 177 178 .. 221 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed