Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Патрушев Л.И. -> "Искусственные генетические системы. Том 1" -> 169

Искусственные генетические системы. Том 1 - Патрушев Л.И.

Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы. Том 1 — М.: Наука, 2004. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): iskusstvenniegeneticheskie2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 163 164 165 166 167 168 < 169 > 170 171 172 173 174 175 .. 221 >> Следующая

3.4.2. Рекомбинантные антитела
Хотя гибридомные технологии еще продолжают достаточно активно использоваться, с появлением новых эффективных методов белковой инженерии, в том числе систем отбора белков на основе разнообразных дисплеев и репрезентативных клонотек случайных белковых последовательностей, mAb начинают постепенно сдавать свои позиции. Новые технологии позволяют отбирать антитела требуемой специфичности непосредственно из суспензии фаговых частиц без иммунизации лабораторных животных и при этом получать белки с совершенно новой специфичностью к антигенам, которые неиммуногенны in vivo. Новые подходы дают возможность снять ограничения, накладываемые на производство антител особенностями иммунного ответа живого организма. В последние годы удалось получить большое количество рекомбинантных антител с новыми свойствами: значительно уменьшить размер их молекул, а также объединить антитела в поливалентные гибридные комплексы, сильно повысив при этом их авидность. Генно-инженерными методами удалось объединить фрагменты антител с разнообразными аминокислотными последовательностями для обеспечения адресной доставки макромолекул. Такие гибридные молекулы, кроме антител, включают ферменты для активации предшественников цитоток-сичных лекарственных препаратов, токсины, белки вирусных частиц, используемые в генотерапии, и сами могут быть включены в липосомы для повышения эффективности химиотерапии. Рекомбинантные антитела применяют для получения биосенсоров, используемых при мониторинге исследуемых молекул в реаль-
ном времени, в том числе опасных для здоровья веществ, загрязняющих окружающую среду [213]. Фрагменты рекомбинантных антител находят применение, по крайней мере, в 30% систем современной иммунодиагностики. Ниже будут кратко рассмотрены эти и некоторые другие приложения технологии рекомбинантных антител к современным фундаментальным и прикладным исследованиям.
Снижение иммуногенности антител. Аминокислотные последовательности полипептидных цепей шАЬ первого поколения целиком кодировались геномом тех животных, которых использовали в качестве источника лимфоцитов при получении гибридом. Хотя такое строение антител не вызывало неудовольствия у исследователей, антитела животного происхождения не находили широкого применения в клинике по двум обстоятельствам. Во-первых, введение чужеродных белков в организм человека часто вызывало у пациентов сильный иммунный ответ, получивший название синдрома антимышиных антител человека (human antimouse antibody - HAMA). Это делало невозможным проведение длительной терапии мышиными антителами. Во-вторых, все изотипы мышиных и крысиных иммуноглобулинов класса IgG (за исключением т2а) не выполняли функций эффекторов иммунного ответа у человека.
Решение этой проблемы было начато с создания методами генной инженерии химерных антител, построенных из гибридных полипептидных цепей, у которых вариабельные участки имели мышиное происхождение, а константные целиком представляли собой последовательности иммуноглобулинов человека [214] (рис. 55,а). Дальнейшим развитием этого направления исследований было получение так называемых “очеловеченных” (humanized) или перестроенных (reshaped) антител, в которых только антигенсвязывающие петли CDR имели мышиное происхождение [215]. Наконец, недавно с помощью двух альтернативных методов были получены рекомбинантные антитела, содержащие только последовательности иммуноглобулинов человека.
В частности, проблема была решена созданием трансгенных мышей (XenoMouse), экспрессирующих после иммунизации только гены иммуноглобулинов человека [216,217]. Для этого на первом этапе были получены трансгенные мыши, у которых с помощью технологии генного нокаута были удалены обеспечивающие рекомбинацию участки локусов тяжелых цепей и легких к-цепей иммуноглобулинов. Поскольку рекомбинация является абсолютно необходимым этапом сборки генов иммуноглобулинов в эмбриогенезе и во время иммунного ответа, нокаутирован-
Моноклональные антитела грызунов
Химерные антитела "Очеловеченные" или Антитела человека
перестроенные антитела
Моноклональные антитела грызунов
Fab
scFv
Fv
VH
в
bisAb
Fab'2
Димерные
миниантитела
cFv
Антитела двойной специфичности и их фрагменты
Рис. 55. Стратегии снижения иммуногенности антител, типы рекомбинантных антител и их фрагментов
а - этапы снижения иммуногенности антител. Путем постепенной замены участков полипептидных цепей антител грызунов соответствующими последовательностями человека удалось в организме грызунов получить нативные антитела человека;
б - типы фрагментов антител, которые обладают антигенсвязывающей активностью
в - антитела и их фрагменты, обладающие двойной специфичностью
ные мыши полностью утратили способность синтезировать собственные антитела. На следующем этапе работы в геном нокаутированных мышей были введены гомологичные гены тяжелых цепей и легких к-цепей иммуноглобулинов человека. Для этого с помощью искусственной хромосомы дрожжей (YАС) был клонирован фрагмент геномной ДНК человека длиной в 1 м.п.о., содержащий указанный локус в эмбриональной конфигурации (т.е. не
Предыдущая << 1 .. 163 164 165 166 167 168 < 169 > 170 171 172 173 174 175 .. 221 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed