Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами" -> 97

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами — М.: Наука, 1983. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): isledovaniebiologicheskihmakromolekul1983.djvu
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 140 >> Следующая

«Biofluor» позволяет определять радиоактивность 3Н в присутствии тех же добавок с эффективностью 45%. Допускается внесение до 2 мл водного препарата на 10 мл сцинтиллятора. Провал счета радиоактивности при малых количествах препарата отсутствует. mI можно просчитывать в сцинтилляторах «Aqua-sol» и «Bioflour» с эффективностью 50—60%.
«Econofluor» удобен в комбинации с солюбилизаторами биологических препаратов —при этом устраняется опасность возникновения хемолюминесценции.
«Riafluor» — специальный сцинтиллятор для использования в конкурентном радиоиммунном методе исследования (см. ниже).
Для общего знакомства ограничимся перечислением нескольких торговых названий сцинтилляторов других фирм: «Instagel» («Packard»); «Readysolv» («Beckman»); «PCS», «ACS» («Amer-sham»); «Unisolve» («Koch-Light»).
Надо заметить, что особой необходимости в приобретении дорогостоящих фирменных сцинтилляторов нет. Строго воспроизводя рецептуру и позаботившись о чистоте исходных реактивов, исследователь может иметь в своем распоряжении надежный и дешевый сцинтиллятор, приготовленный в лабораторных условиях. По эффективности счета он лишь немного будет уступать лучшим образцам продажных сцинтилляционных смесей.
Некоторые дополнительные замечания
Выбор объема сцинтиллятора связан с геометрией прибора — с размерами и расположением фотокатодов ФЭУ. Обычно оптимальный объем лежит в интервале 10—15 мл. Для объема 5 мл снижение эффективности счета еще мало заметно. Фильтры, лежащие на дне флакона, можно просчитывать и в объеме 2 мл, так как область сцинтилляций все равно ограничена близкой окрестностью поверхности фильтра.
При хранении флаконов с препаратами, растворенными в сцинтилляторе, особенно при малых количествах препарата, может наблюдаться постепенное снижение счета. Причиной этого служит сорбция препарата на стекле флакона, в результате чего препарат постепенно выходит из сцинтиллятора. Уже отмечалось, что это явление особенно опасно при счете двойной метки. Ослабленная за счет самопоглощения в сорбированном слое, радиоактивность одного изотопа может просчитываться как радиоактивность другого (с меньшей энергией излучения).
При просчете фракций после центрифугирования в градиенте плотности раствора CsCl в толуол-тритоновом сцинтилляторе аликвоты следует разбавлять водой по крайней мере в отношении 2: 1, причем объем разбавленного раствора не должен превышать 1 мл на 10 мл сцинтиллятора. Это связано с тем, что очень высокая концентрация соли мешает воде взаимодействовать с детергентом, поэтому раствор оказывается нестабильным. По той же причине насыщенные растворы сульфата аммония для просчета радиоактивности надо разбавлять в 10 раз (!). Как уже упоминалось, 20—30%-ный раствор сахарозы, в зависимости от используемого сцинтиллятора, иногда тоже приходится разбавлять водой.
Во всех этих случаях критерием пригодности для счета является гомогенность (не обязательно прозрачность, но однородность) раствора препарата в сцинтилляторе. Каждый флакон перед его установкой в прибор следует внимательно осмотреть.
При просчете радиоактивности ,4С-бикарбоната может иметь место выделение 14С02 и установление равновесия жидкость—газ во флаконе, причем в счете будет участвовать только 14С02, растворенный в жидкости. С этим можно бороться путем защелачи-вания сцинтиллятора, например добавлением в него 1 мл 0,1 М. раствора NaOH. При этом, однако, следует контролировать возможность хемолюминесценции.
Были опубликованы любопытные, а для соответствующих количественных исследований — очень важные данные о том, что счет 3Н-аминоацил-тРНК в растворе и на фильтрах может в три раза превысить счет эквивалентного количества ^-аминокислоты. Было предположено, что ППО и ПОПОП ассоциируют с тРНК, тем самым увеличивая эффективную концентрацию сцинтилляторов вблизи слабого [i-эмиттера [Haertle, Augustyniak, 1978]. В более поздней работе эти данные подтвердились только
для счета на фильтрах [Kraal, Swart, 1980], так что вопрос заслуживает дальнейшего выяснения.
В некоторых случаях, например при просчете фракций после хроматографического разделения смеси компонентов малой исходной активности, приходится вносить в сцинтиллятор каждую фракцию целиком, а затем извлекать ее обратно для дальнейшего анализа. Для нуклеозидов, аминокислот и сахаров в этом случае рекомендован следующий прием. Фракции с колонки вносят во флаконы счетчика и там сушат, продувая теплый воздух. Затем заливают по 1 мл метанола, перемешивают и добавляют по 5 мл раствора ППО (4 мг/мл) и ПОПОП (0,1 мг/мл) в толуоле (без тритона Х-100). Эффективность счета в таком метанол-толуольном сцинтилляторе оказывается высокой: 32,4% для 3Н и 83,2% для |4С. После просчета радиоактивности в каждый флакон вносят по 2 мл воды и энергично встряхивают в течение
1 мин. Дают разделиться двум фазам и нижнюю (водную) отсасывают пастеровской пипеткой. Верхнюю фазу еще два раза экстрагируют так же. Объединенные водные фазы дважды экстрагируют половинным объемом толуола и дважды — таким же объемом эфира, а затем сушат в пленочном испарителе. Выход препарата — более 90%. Его можно далее анализировать методом ТСХ [Saffhill, 1981].
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed