Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Ниже приведены рецепты и характеристики двух наиболее употребительных сцинтилляторов на основе диоксана.
Раствор Брея: 60 г нафталина+4 г ППО+0,2 г ПОПОП+ + 100 мл метанола+20 мл этиленгликоля; диоксан до 1 л. Максимальная эффективность счета трития — 30%, 14С — 85%.
В 10 мл сцинтиллятора можно вносить до 3 мл водного препарата. Допускается охлаждение до —3°.
Сцинтиллятор с повышенной эффективностью счета: 100 г нафталина + 7 г ППО+О.З г ПОПОП (или диметил-ПОПОП); диоксан до 1 л. Максимальная эффективность счета трития — 35%, “С — 90%. Добавление до 2 мл воды на 10 мл сцинтиллятора еще очень мало сказывается на эффективности счета, но далее она снижается. Нафталин начинает выпадать из раствора при 12°. Растворяющая способность хуже, чем у раствора Брея (легче выпадают в осадок соли). Сцинтиллятор может расслаиваться, что приводит к заметному падению эффективности счета.
Готовые к употреблению сцинтилляторы (а также солюбилизаторы; см. ниже) выпускает целый ряд фирм, в том числе производителей счетчиков радиоактивности. В последние годы их все больше вытесняет американская фирма «NEN» («New England Nuclear») — поставщик радиоактивных изотопов. Торговые названия различных сцинтилляторов этой фирмы часто встречаются в описаниях экспериментов. Составы их засекречены, но принцип действия и характеристики приводятся в фирменных описаниях. Ввиду их распространенности далее будут упоминаться только сцинтилляторы этой фирмы. В частности, она предлагает диоксановый сцинтиллятор «Aquafluor». В рекламе утверждается, что эффективность счета 3Н в этом сцинтилляторе достигает 40%, а “С — 90%. На 10 мл сцинтиллятора можно вносить до 2 мл воды.
Хорошими характеристиками обладает и отечественный сцинтиллятор на основе диоксана (ЖС-8).
Казалось бы, использование диоксановых сцинтилляторов полностью решает проблему счета водных препаратов. К сожалению, это не так. Во-первых, указанные значения эффективности счета трития примерно на 20% ниже того, что удается полу-
чить, используя описываемые ниже «толуол-тритоновые» сцинтилляторы. Но это — не главное. В конце концов, погоня за «рекордной» эффективностью счета носит скорее рекламный, чем деловой характер: уж очень редки случаи, когда возможность просчитать радиоактивность препарата с эффективностью 90% вместо 85% имеет существенное значение. Куда хуже другое. В диоксане и сцинтилляторах на его основе при хранении обра* зуются перекиси, которые, с одной стороны, служат сильными тушителями сцинтилляций, а с другой — в качестве окислителей могут стимулировать хемолюминесценцию.
Перед приготовлением сцинтиллятора диоксан следует обязательно проверить на наличие перекисей. Для этого к 0,5 л диок-сана добавляют 1 мл разбавленного водного раствора иодистого калия и 0,5 мл 20%-ной НС1, а затем — несколько капель раствора крахмала. В присутствии перекисей раствор приобретает синюю окраску. Для очистки от перекисей 2 л диоксана кипятят с обратным холодильником в течение часа над 10—15 г SnClj. Делают пробу на присутствие перекисей и, если надо, добавляют еще 5 г SnClt и кипятят еще 30 мин. Далее добавляют 27 мл концентрированной НС1 и кипятят с обратным холодильником в течение 12 ч, пробулькивая азот. Для удаления воды и растворенного в ней кислорода после охлаждения медленно добавляют твердый КОН до образования двух фаз. Диоксан с водной фазы сливают и повторяют операцию расслоения с помощью КОН. Затем его кипятят в течение 10—12 ч с обратным холодильником над натрием и перегоняют при атмосферном давлении (^°КИп= = 101,3°). Хранить диоксан и диоксановый сцинтиллятор следует без доступа воздуха в темноте.
Для приготовления сцинтиллятора следует брать очень чистый нафталин (сублимированный). Высокая чистота диоксана и нафталина очень важна для точного измерения радиоактивности. Для простого обнаружения и грубой оценки радиоактивности можно использовать продажный диоксан высокой степени чистоты («сцинтилляционный») без дополнительной очистки.
В заключение отметим, что нередко наблюдающееся в диок-сановом сцинтилляторе выпадение в осадок соли не снижает эффективности счета. Опасность представляет расслоение сцинтиллятора— отделение солевого раствора вместе с растворенным в нем радиоактивным препаратом. Однако есть один практически важный случай, когда в этом отношении толуол-тритоновые сцинтилляторы уступают раствору Брея. Речь идет о счете радиоактивности во фракциях после сахарозного градиента в тех случаях, когда из-за низкой радиоактивности нельзя ограничиться малыми аликвотами и приходится просчитывать большие объемы концентрированных растворов сахарозы. В толуол-три-тоновых сцинтилляторах это часто приводит к расслоению с заметной потерей эффективности счета, тогда как раствор Брея «держит» гораздо более высокую концентрацию сахарозы.
Сцинтилляторы на основе толуола и ксилола
Толуол в качестве растворителя сцинтиллятора обладает явными преимуществами по сравнению с диоксаном. Он не образует перекисей и дешев, а продажные препараты марки «сцин-тилляционный» можно использовать без дополнительной очистки. Наконец, он в принципе более эффективен, чем система, диок-сан—нафталин. n-Ксилол еще немного лучше, чем толуол. Про-блема заключается в том, чтобы сцинтилляторам на их основе придать способность смешиваться с водой. Ее успешное решение было найдено путем использования для этой цели детергентов, в частности Тритона Х-100. Оптимальное соотношение толуола и Тритона Х-100 в разных рецептах сцинтилляторов лежит в пределах от 3: 1 до 2: 1. Тритон несколько снижает эффективность счета, но зато позволяет просчитывать большие объемы водных препаратов. В качестве примера приведем один из рецептов: 1 л толуола+333 мл Тритона X-100-1-4 г ППО+0,1 г ПОПОП или диметил-ПОПОП. Такой сцинтиллятор при малых объемах водных препаратов позволяет достигнуть эффективностей счета в 50% Для 3Н и 95% для 14С. При увеличении объема воды эффективность счета снижается, но вначале очень медленно. Так при внесении 4 мл водного препарата в 10 мл сцинтиллятора она уменьшается лишь на 10—12% от своего максимального значения.
