Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Установив ВПв в найденное положение, вносят в прибор стандарт 3Н и выбирают положение НПВ так, чтобы в канале В только-только начинался счет импульсов трития. Таким образом обеспечивается наиболее полное использование канала В для счета углерода, и только его. Положение порогов канала В иллюстрирует рис. 69.
Для настройки канала А (тритиевого) усиление в нем следует выбрать близким к максимальному, так как янепгия и.члучр-
Рис. 69. Спектры амплитуд импульсов и установка порогов при счете двойной метки в счетчиках с линейными усилителями
иия трития мала. После этого в прибор помещают стандарт ПС. Импульсы углерода в канале А благодаря такому усилению будут лежать главным образом в области очень больших амплитуд. Манипулируя положением ВПД, «отрезают» их так, чтобы счет углерода в канале трития упал примерно до 7% от того, что считается в канале В. Нижний порог НПА опускают до минимума, соответствующего началу спектра амплитуд трития. Найти этот минимум при выбранном усилении можно так же, как было описано для логарифмического усилителя. «Окно» между двумя порогами канала А будет достаточным, чтобы обеспечить вполне приемлемую эффективность счета 'Н.
Настройка каналов закончена. Теперь с помощью стандартов ’Н и “С легко определить три необходимые эффективности счета — ?, а, и ?уА. Все расчеты производят точно так же, как и в случае логарифмического усилителя. Аналогична и процедура введения поправки на тушение.
Счет двойной метки (3Н и 1251) в жидкостном сцинтилляционном счетчике
Этот любопытный пример одновременного счета ^-излучения ***1 и ^-излучения трития (без тушения) описан Кобаяши для смеси 1281-брадикинина и эНлейцина [Kobayashi, 1978]. На рис. 70 совмещены спектры амплитуд 1251 и 3Н, снятые при одинаковом усилении (20% от максимального) в двух каналах счетчика «Packard TriCarb 3385». Из рисунка видно, что практически все импульсы, обязанные своим происхождением комптоновским электронам, попадают в область более высоких энергий, чем jj-частицы трития. Это позволяет настроить канал В так, чтобы в нем просчитывался только ,251. В канал А, очевидно, наряду с импульсами 3Н будут попадать и импульсы счета электронов Оже, излучаемых при ^-распаде 1251. На их долю приходится довольно значительная часть импульсов ^-излучения, однако описанным приемом вклад электронов Оже можно отделить от счета трития в канале А.
Приведем данные автора о настройке счетчика и значениях эффективности счета иода (?и) и трития (Ет). Канал В: усиление— 20% от максимального; НП — на делении 240; ВП — на
Рис* 70. Сопоставление спектров амплитуд импульсов 1251 и 3Н при одинаковом усилении линейного усилителя счетчика
Л/ — относительное число импульсов; VF — положение порога (деления шкалы); 1 — область электронов Оже; 2 — область комптоновских электронов
делении 1000 (последнее соответствует отсутствию ограничения амплитуды); ?„=29,1%; ?т=0,01%". Канал А: усиление —50% от максимального; НП — на делении 10; ВП — на делении 450; ?„=26,4%; ?,—36,7%. По этим эффективностям можно вполне надежно подсчитать истинные радиоактивности 1251 и 3Н в препарате.
Специфическую двойную метку для гемоглобина крови можно осуществить с использованием двух изотопов железа — ’9Fe и 55Fe. Энергия ¦у-излучения у первого из них значительно выше, чем у второго, соответственно разнесены по амплитудам и спектры комптоновских электронов. Кроме того, 5sFe, в отличие от i!*Fe, дает при распаде электроны Оже. Счет можно осуществить в двухканальном ^-счетчике или в ^-счетчике.
Глава 2
СПОСОБЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ И РЕГИСТРАЦИИ РАДИОАКТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ
ПРЕПАРАТЫ В ВИДЕ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ
Такие препараты в биологических исследованиях встречаются наиболее часто; к ним относятся физиологические жидкости, фракции с хроматографических колонок или после ультрацентрифугирования, элюаты гелей после электрофореза или пластинок ТСХ, различные реакционные смеси и многое другое. Главная проблема здесь заключается в обеспечении полного растворения значительных объемов водного препарата в органическом растворителе сцинтиллятора. Эта проблема решается двумя способами.
Сцинтилляторы на основе диоксана
Выше упоминалось, что в качестве растворителя, которому ^-частицы непосредственно передают свою энергию, в сцинтилляторах можно использовать раствор нафталина в диоксане. Точ-
нее будет назвать диоксан первичным растворителем, а нафталин— вторичным (на его долю приходится не более 10%). Концентрация собственно сцинтилляторов (ППО + ПОПОП) еще меньше (более чем на порядок). Таким образом, основная масса сцинтиллятора — это диоксан, а он смешивается с водой в любых пропорциях. Правда, примесь воды ухудшает растворимость нафталина в диоксане, особенно при пониженной температуре. Однако, во-первых, для улучшения растворимости в раствор можно добавить метанол (но не этанол, поскольку он вызывает тушение) и этиленгликоль, а во-вторых, в современных счетчиках с «малошумящими» ФЭУ уже нет необходимости вести счет радиоактивности при пониженной температуре, как это делали раньше.
