Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами" -> 92

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами — М.: Наука, 1983. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): isledovaniebiologicheskihmakromolekul1983.djvu
Предыдущая << 1 .. 86 87 88 89 90 91 < 92 > 93 94 95 96 97 98 .. 140 >> Следующая

Здесь надо сделать несколько предостерегающих замечаний. Во-первых, метод внешнего стандарта пригоден только для растворенных препаратов. Тушение может быть обусловлено и веществами, поступившими с препаратом, но они должны перейти в раствор сцинтиллятора, так как все явления, следующие за if-облучением, разыгрываются исключительно в этом растворе. Учитывать самопоглощение излучения в осадках и на фильтрах методом внешнего стандарта нельзя. Можно уточнить, что, кроме истинных растворов, рассматриваемый метод пригоден и для «псевдорастворов» — тонких эмульсий, например системы толуол—Тритон Х-100—вода, однако лишь до определенного содержания в ней воды. Подробнее об этом сказано ниже. Точно такая же эмульсия при этом должна быть и в наборе стандартов тушения.
Во-вторых, объем сцинтиллятора в рабочих препаратах должен быть таким же, как в наборе стандартов. Вспомним, что эффективность регистрации ^-излучения зависит от объема сцинтиллятора. Просчет препаратов в меньших объемах сцинтиллятора, чем использовались при построении кривой тушения, дает завышенные значения радиоактивности. Наконец, при внешней стандартизации не рекомендуется использовать пластиковые флаконы ввиду постепенной диффузии толуола в материал стенок
флакона, где под действием ^-облучения растворитель будет сцинтиллировать и при пустом флаконе.
В новых счетчиках фирмы «Beckman» вместо отношения внешнего стандарта R используется другой параметр, также однозначно связанный с явлением тушения,— величина сдвига спектра амплитуд комптоновских электронов. На рис. 66 она обозначена «Я». Кривая эффективности счета строится в координатах ? и Я. Таким образом, можно обойтись одним дополнительным каналом стандартизации. Принцип метода учета тушения по существу своему остается тем же — использование корреляции изменения эффективности счета и сдвига спектра амплитуд в результате тушения.
" Учет тушения при счете двойной метки
Настройку каналов А и В для регистрации двойной метки производят по стандартам радиоактивности без тушения точно так же, как описано выше и показано на рис. 62. Однако в этом случае нельзя пользоваться при расчете тремя эффективностями счета ЕТ'Л, ЕуВ и ЕуЛ, вычисленными для этой настройки по стандартам без тушения.
Вместо этого надо воспользоваться двумя наборами стандартов радиоактивности (®Н и |4С) с различной степенью тушения. Не изменяя настройки каналов, следует подсчитать значения трех упомянутых эффективностей счета для каждого из флаконов обоих наборов, регистрируя каждый раз отношения внешнего стандарта, и построить три кривых тушения для трех эффективностей (рис. 67). Каждой степени тушения отвечают одно значение отношения внешнего стандарта R и три значения эффективности счета: трития в канале А и углерода в каналах В и А. Заметим, что, в отличие от двух других, эффективность счета углерода в канале В (?уВ) с увеличением степени тушения {.Rmax—*~Rmin) возрастает. Это — результат сдвига спектра в сторону меньших амплитуд: все большая часть импульсов углерода попадает в канал трития. Это видно из рис. 68, где пунктиром показаны спектры амплитуд ЭН и 14С без тушения, а жирной линией — те же спектры при наличии тушения. При неизменной регулировке порогов легко видеть, как увеличивается доля импульсов спектра углерода, амплитуда которых оказывается ниже (на рисунке — левее) ВПД. При сильном тушении и неудачном выборе порогов вся радиоактивность 14С может оказаться в канале А и возникнет ложное представление о том, что меченный по углероду компонент в составе препарата отсутствует.
При просчете рабочего препарата (те же сцинтиллятор и настройка каналов!) прибор печатает значения счета в каждом канале (Na и NB), а также отношение внешнего стандарта /?, определяемое автоматически для этого препарата. По нему из трех кривых тушения можно найти значения трех эффективностей и далее провести точно такие же расчеты истинных радиоактивно-
Е
1,0
Eg,»
\
\
Y,B
2 3* 5 R
НПА ВПА нпв
ВПв
Рис. 67. Кривые тушения при счете двойной метки (см. текст)
Рис. 68. Сдвиг спектров амплитуд в результате тушения при счете двойной метки (увеличение вклада ,4С в счет, регистрируемый в канале SH; см. текст)
стей обоих изотопов, какие были описаны выше для счета двойной метки без тушения.
При просчете большой серии препаратов с заранее неизвестной степенью тушения все эти вычисления становятся утомительными и трудоемкими, поэтому естественно поручить их небольшому компьютеру. Таким устройством оснащаются все современные счетчики. Чтобы компьютер мог подсчитывать все эффективности и истинную радиоактивность каждого препарата, в него надо ввести экспериментальную кривую внешней стандартизации или три кривых в случае счета двойной метки. Сообщить компьютеру вид любой плавной зависимости E=f(R) можно, найдя хорошее приближение к этой зависимости в виде кубического уравнения: E~aR3+bRz+cR-j-d. Коэффициенты а, Ь, с и d можно подобрать так, что график будет практически неотличим от полученной в эксперименте кривой тушения в пределах крайних значений (Rm 1а и Rmsa) по ее оси абсцисс. Способы такого подбора коэффициентов а—d хорошо известны в прикладной математике и приводятся в фирменных описаниях счетчиков.
Предыдущая << 1 .. 86 87 88 89 90 91 < 92 > 93 94 95 96 97 98 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed