Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
ного сцинтиллятора. Счетчик, снабженный компьютером и микропроцессором, проделывает все операции настройки и расчетов автоматически, если ему «сообщить» значения радиоактивностей стандартов, а сами стандарты поочередно установить в прибор.
Учет тушения при счете одного изотопа
Помимо всех прочих потерь счета, необходимо учесть и потери, обусловленные описанным выше тушением сцинтилляций. Рассмотрим три способа решения этой задачи.
Метод внутренней стандартизации. Этим методом можно вос-юльзоваться при счете радиоактивности в простейшем однока-1альном счетчике. В принципе он очень прост. Просчитывают эабочий препарат и записывают результат счета. Обозначим его Vn. Затем в тот же самый флакон с препаратом вносят точно изустную радиоактивность стандарта — Д.. Снова просчитывают шсло импульсов в минуту, на этот раз суммарное Nx, и вычита-шем определяют приращение счета, обусловленное внесенной )адиоактивностью: NC=NS—Nn. Так как импульсы радиоактивности препарата и стандарта просчитываются независимо друг от фуга, эффективность счета (с учетом тушения) можно подсчи-'ать для импульсов стандарта: E=MJDa. С точно такой же эффективностью просчитана и радиоактивность препарата, поэто-лу ее истинное значение можно найти из соотношения: ?>„=
=NJE.
Несмотря на свою простоту, метод этот трудоемок, требует )чень точной дозировки вносимого стандарта и исключает возможность повторного просчета радиоактивности препарата. Если тушение изменяется от препарата к препарату, то описанную операцию надо повторять для каждого флакона.
Метод отношения каналов. В этом случае необходим счетчик ! двумя каналами. Оба канала используют для счета одного и того же изотопа, но своеобразная настройка этих каналов позво-1яет выявить и оценить эффект тушения. При этом используют отмеченное выше явление сдвига спектра амплитуд при наличии ¦ушения (см. рис. 49). Чем оно сильнее, тем больше сдвигается :пектр (рис. 63).
Метод требует набора стандартов данного изотопа с разной ;тепенью тушения для выбранного сцинтиллятора. В качестве тушителя может быть использовано любое подходящее вещество, ie обязательно то же самое, которое обусловливает тушение в эабочем препарате. Впрочем, желательно все-таки имитировать 1рироду тушения. В качестве тушителя химической природы мо-«но взять, например, четыреххлористый углерод, а в качестве оптического — азобензол. Наборы стандартов с тушением (6—8 флаконов) имеются в продаже, но в этом случае опять возникает юпрос об идентичности сцинтилляторов. Для приготовления такого набора в условиях лаборатории поступают следующим об-
'loqrnw R 1-R 90 гЬ.пяьгпипта о ппиняnfi'KPM'aiwtи рнмитилла-
Рис. 63, Изменение спектра амплитуд импульсов по мере увеличения степени тушения (установка порогов для коррекции тушения по методу отношения каналов)
Номера 1—8 на кривых соответствуют номерам флаконов с возрастающим со-держанием тушителя (см. текст)
тора вносят по возможности одинаковую радиоактивность без тушителя — примерно 100 000 расп./мин в каждый флакон. Потом все их просчитывают и отбирают восемь наиболее близких по уровню счета, для которых должно иметь место соотношение (2]fNfNcp) X 100<0,2, где N—счет в данном флаконе, Ncp — среднее значение счета по отобранным восьми флаконам. Далее во все флаконы, начиная со второго, вносят постепенно возрастающее количество тушителя {10%-ного раствора СС14 или 0,1%-ного раствора азобензола в сцинтилляторе). Объемы жидкости во всех флаконах уравнивают добавлением чистого сцинтиллятора.
Пусть рабочим каналом счета препарата будет канал А. Его настраивают на максимальный счет по флакону № 1 (без тушителя), как было описано выше — положение порогов канала Л на рис. 63 можно сопоставить с их положением на рис. 59. Для настройки канала В в прибор устанавливают флакон № 8 с наибольшим содержанием тушителя. Уменьшенный по сравнению с флаконом № 1, но все же максимальный уровень счета радиоактивности в этом флаконе можно зарегистрировать в канале А. Положение верхнего порога канала В выбирают таким образом, чтобы счет радиоактивности флакона № 8 в этом канале составил 60—70% от максимального (см. рис. 63). Нижний порог (НПВ) устанавливают как обычно — настройка закончена. Теперь просчитывают каждый из восьми флаконов и записывают соответствующие значения счета в обоих каналах — ЛГА и NB. Вычисляют для каждого флакона эффективность счета в канале A: E=Na/D. Здесь символ D обозначает истинную радиоактивность, одинаковую во всех флаконах. Величина Е, очевидно, дол' жна плавно уменьшаться от флакона № I к флакону № 8 за счет увеличения тушения. Затем для каждого из флаконов подсчитывают отношение (/?) уровней счета в каналах Л и В: R=MAfNB. Это отношение, оставаясь большим единицы, тоже будет уменьшаться от флакона № 1 к флакону № 8. Причина состоит в том, что несмотря на тушение счет в канале В будет плавно возрастать благодаря сдвигу спектра амплитуд (см. рис. 63). Если для флакона № 8 установка ВПв позволяла зарегистрировать 60—70% от максимального счета (т. е. от полного его спектра), то при просчете флакона № 1 в канал В попадет лишь неболь-
